英文名稱 ： α-Ketoglutaric Acid (α-KG) Ccontent Assay kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/96S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
提取液一
|
液體110mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
提取液二
|
液體17mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑一
|
液體13 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
液體1.2 mL×1支
|
2-8℃保存
|
|
試劑三
|
粉劑×1瓶
|
-20℃保存
|
|
試劑四
|
粉劑×1支
|
-20℃保存
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品
|
粉劑×1支
|
2-8℃保存
|
產(chǎn)品說明：
α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate，α-KG）是三羧酸循環(huán)中重要的代謝中間產(chǎn)物，是連接細(xì)胞內(nèi)碳-氮代謝的關(guān)鍵節(jié) 點。α-酮戊二酸作為一種短鏈羧酸分子， 是谷氨酰胺、谷氨酸等多種重要的氨基酸的前體， 不僅直接參與供能， 還 參與細(xì)胞內(nèi)多種化學(xué)反應(yīng)，具有多種生理作用。
GDH催化NH4+ 、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+ ，引起340nm吸光度下降。通過測定NADH的變 化，計算α-酮戊二酸含量。
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋/金屬浴/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、微量石英比色 皿/96 孔 UV 板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。
注意事項：
1. 采用 96 孔 UV 板測定時， 如果樣本A1測定＜A1空白或?A測定大于0.5，可以用蒸餾水對樣本進(jìn)行稀釋或者縮短第二步37℃反應(yīng)時間；如果?測定小于0.01，可以加大樣本量或者延長第二步37℃反應(yīng)時間。計算時同步修改 計算公式。
2. 采用微量石英比色皿測定時， 如果樣本A1測定＜A1空白或?A測定大于0.8，可以用蒸餾水對樣本進(jìn)行稀釋或者縮 短第二步37℃反應(yīng)時間；如果?A測定過小，可以加大樣本量或者延長第二步37℃反應(yīng)時間。計算時同步修改計算公式。
3. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑， 因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。
4. 溫度對該實驗影響較大,務(wù)必保持反應(yīng)溫度在37℃。
實驗實例：
1 、稱取0.1066g小鼠肝臟組織,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用 96 孔UV板測得計算ΔA測定=A1測定-A2測定=0.694-0.679=0.017 ,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A1標(biāo)準(zhǔn)-A2標(biāo)準(zhǔn)=0.594-0.307=0.287,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.637- 0.633=0.004 。帶入公式計算：
α-KG含量(nmol/g 質(zhì)量)=475×?A÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =204.69 nmol/g質(zhì)量
