英文名稱 ： α-Ketoglutaric Acid (α-KG) Ccontent Assay kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/96S
儲(chǔ)存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 紫外分光光度法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
提取液一
|
液體60mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
提取液二
|
液體9mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑一
|
液體40 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
液體4mL×1支
|
2-8℃保存
|
|
試劑三
|
粉劑×1瓶
|
-20℃保存
|
|
試劑四
|
粉劑×1瓶
|
-20℃保存
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品
|
粉劑×1支
|
2-8℃保存
|
產(chǎn)品說明：
α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate，α-KG）是三羧酸循環(huán)中重要的代謝中間產(chǎn)物，是連接細(xì)胞內(nèi)碳-氮代謝的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。α-酮戊二酸作為一種短鏈羧酸分子， 是谷氨酰胺、谷氨酸等多種重要的氨基酸的前體， 不僅直接參與供能， 還參與細(xì)胞內(nèi)多種化學(xué)反應(yīng)，具有多種生理作用。
GDH催化NH4+ 、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+ ，引起340nm吸光度下降。通過測定NADH的變 化，計(jì)算α-酮戊二酸含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/金屬浴/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研 缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。
注意事項(xiàng)：
1. 如果樣本 A1 測定＜A1 空白或?A 測定大于 0.8，可以用蒸餾水對樣本進(jìn)行稀釋或者縮短第二步 37℃反應(yīng)時(shí)間；如果?A 測定小于 0.01，可以加大樣本量或者延長第二步 37℃反應(yīng)時(shí)間。最終計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。
2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑， 因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。
3. 溫度對該實(shí)驗(yàn)影響較大， 務(wù)必保持反應(yīng)溫度在 37℃。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
稱取 0.1066g 小鼠肝臟組織進(jìn)行樣本處理，按照測定步驟操作，用 1mL 石英比色皿測得計(jì)算 ΔA 測定=A1 測定-A2 測定=1.201- 1.175=0.026 ，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A1 標(biāo)準(zhǔn)-A2 標(biāo)準(zhǔn)=1.015-0.487=0.528 ，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=1.080- 1.074= 0.006 。
帶入公式計(jì)算：
α-KG含量（nmol/g 質(zhì)量）=475×(ΔA測定-ΔA空白) ÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)-ΔA空白)÷W×F =170.72 nmol/g 質(zhì)量
