本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗體與結合在包被抗體上的抗原結合、生物素與親和素異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。
白脂素(Asprosin)是哺乳動物(白色脂肪)組織中產生的一種蛋白質激素,可刺激肝臟將葡萄糖釋放到血液中。白脂素由基因FBN1編碼,作為原纖維蛋白原的一部分,并通過異性蛋白水解作用從原纖維蛋白的C末端釋放。在肝臟中,白脂素通過環狀單磷酸腺苷(cAMP)依賴性途徑激活葡萄糖的快速釋放。
飯后,肝臟在胰島素的作用下以糖原的形式儲存過量的葡萄糖。在兩餐之間(或禁食期間),刺激肝臟分解糖原以釋放葡萄糖(糖原分解),并合成新的葡萄糖(糖異生)。然后葡萄糖被釋放到血液中,以維持大腦和其他器官的正常功能。糖原分解和糖異生是由胰高血糖素等激素激活肝細胞中的環磷酸腺苷(AMP)通路,該cAMP促進代謝酶的激活,導致葡萄糖的產生和釋放。
有研究發現,表現出胰島素抵抗和肥胖的患者血清中的Asprosin水平升高。接受減肥手術的肥胖患者手術后血清中的Asprosin水平下降。在對動物進行的藥物性的Asprosin消耗實驗中,初步結果提出了Asprosin用于治療II型糖尿病和肥胖癥的可能性。例如,Chopra及其同事觀察到,將針對Asprosin的抗體注射到糖尿病小鼠體內時,血糖和胰島素水平得到了改善。有報道稱Asprosin能穿過血腦屏障,調節控制饑餓感和飽腹感的下丘腦中的神經元,抑制肥胖小鼠中的Asprosin會減少進食并導致體重減輕。
小鼠elisa檢測試劑盒操作步驟
1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
9. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。