英文名稱 : Creatine Content Assay Kit
產品包裝 : 盒裝
產品規格 : 50T/24S
儲存條件 : -20℃
檢測方法 : 可見分光光度法
有 效 期 : 6個月
產品內容:
試劑名稱
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規格
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保存條件
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提取液一
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液體30mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體5mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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粉劑×2支
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-20℃保存
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試劑一稀釋液
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液體15 mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑二
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液體15mL×1瓶
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-20℃保存
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標準品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產品說明:
肌酸(Creatine)是一種含氮化合物,自然存在于脊椎動物體內,能夠輔助為肌肉和神經細胞提供能量。肌酸可由精氨酸(arginine)、甘氨酸(glycine)及甲硫氨酸(methionine)三種氨基酸合成,可由人體自行合成,也可以從食物中攝取。大約95%的肌酸存在于骨骼肌中,主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補充劑主要通過增加肌肉質量,增強運動表現能力。
肌酸也被作為神經肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究,它可能有助于保護神經和改善細胞生物功能狀態。
肌酸酶偶聯肌氨酸氧化酶,可將肌酸轉化為甘氨酸、甲醛、過氧化氫,過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。
注意事項:
1、顯色完成后,請在 10 min 之內完成檢測。
2、提取液中含有蛋白沉淀劑,提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酸含量需要另取樣本,即取相同質量的組織、同等數目的細菌或細胞,用 1.1875mLPBS(生理鹽水)勻漿;取相同體積的血清(漿),用 1.206mLPBS(生理鹽水)勻漿(相當于提取步驟最終樣本上清液),用 BCA 法進行蛋白濃度測定。
3、如果測定吸光值低于或超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
4、試劑一、試劑二對人體有刺激性,請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴乳膠手套操作
實驗實例:
1、取 0.1g 小鼠肌肉加入1mL 提取液一進行勻漿研磨離心,取 0.8mL 上清后加 0.15mL 提取液二,離心取上清稀釋 2 倍后按照測定步驟操作,測得計算 ΔA 測定=A 測定-A 對照=1.335-0.058=1.277,帶入標準曲線y=0.0118x+0.0343,計算 x=105.3。按樣本質量計算含量得:
肌酸含量(μg/g 質量)=1.044×x÷W ×2(稀釋倍數)=2198.7 μg/g 質量。
2、取100μL 牛血清加入 1mL 提取液一,離心取 0.8mL 上清后加 0.15mL 提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,測得計算 ΔA 測定=A 測定-A 對照=0.596-0.069=0.527,帶入標準曲線 y=0.0118x+0.0343,計算x=41.754。按照液體體積計算含量得:肌酸含量(μg/mL)=11.482×x= 479.4 μg/mL。