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產品詳情

英文名稱 : Lacate Dehydrogenase(LDH) Activity Assay Kit
產品包裝 : 盒裝
產品規格 : 100T/48S
儲存條件 : -20℃
檢測方法 : 微量法
有 效 期  : 6個月

產品組成:

試劑名稱

規格

保存條件

提取液

液體60mL×1瓶

2-8℃保存

試劑一

液體7 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑

粉劑×1 支

-20℃保存

試劑

液體25mL×1瓶

2-8℃保存

試劑

液體 60 mL×1

2-8℃保存

標準品

液體1 mL×1支

2-8℃保存


產品說明:
L-LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是糖酵解途徑的末端酶, 催化丙酮酸與L-乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。


L-LDH催化NAD+氧化L-乳酸生成丙酮酸, 丙酮酸進一步與2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。




注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。


需自備的儀器和用品:
可見分光光度計,恒溫水浴鍋,臺式離心機,可調式移液器,1mL玻璃比色皿,研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀,冰和蒸餾水。


注意事項:

1.ΔA大于1.3或者小于0.01時,建議將樣本用蒸餾水稀釋或者增大樣本量進行實驗,注意同步修改計算公式。

實驗實例:
1. 稱取0.103g景天葉片, 加入1mL提取液, 進行冰浴勻漿, 8000g ,4℃離心10min,取上清置冰上待測。之后按 照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.275-0.199=0.076,帶入標曲y=0.5218x+0.0063, R2=0.9983,得x=0.134 μmol/mL,計算乳酸脫氫酶活性得:
L-LDH(U/g質量)=66.67 ×x÷W =86.74 U/g
2. 稱取0.109 g兔肝,加入1mL提取液,進行冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清用蒸餾水稀釋80倍后置冰 上待測。之后按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.795-0.132=0.663,帶入標曲 y=0.5218x+0.0063,R2=0.9983,得x=1.259 μmol/mL,計算乳酸脫氫酶活性得:
L-LDH(U/g質量)=66.67 ×x÷W×稀釋倍數=61605.53 U/g
3. 取10μL馬血清之后按照測定步驟操作, 用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.415-0.161=0.254,帶入標曲y=0.5218x+0.0063 ,R2=0.9983,得x=0.475 μmol/mL,

計算乳酸脫氫酶活性得:
L-LDH(U/mL)=66.67×x =31.67U/mL
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