英文名稱(chēng) ： D-lactate Dehydrogenase(D-LDH)Activity Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/24S
儲(chǔ)存條件 ： -20℃
檢測(cè)方法 ： 可見(jiàn)分光光度法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱(chēng)
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規(guī)格
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保存條件
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提取液
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液體30 mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×1支
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-20℃保存
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試劑三
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體60mL×1瓶
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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液體1mL×1支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說(shuō)明：
乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase ,LDH)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。根據(jù)其催化底物-乳酸構(gòu)型的不同，可分為D-乳酸脫氫酶(D-LDH ，EC 1.1.1.28 )與L-乳酸脫氫酶(L-LDH ，EC 1.1.1.27 )。
D-LDH催化NAD+氧化D-乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色， 顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、 研缽/勻漿器/細(xì)胞超 聲破碎儀、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1.如果測(cè)定管吸光值接近空白或ΔA測(cè)定過(guò)低，可適當(dāng)加大樣本量后重新測(cè)定；如果測(cè)定管吸光值超過(guò)1.5或ΔA測(cè)定超過(guò) 0.4，建議將樣本用提取液適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1 、取0.109g兔腎加入1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.437-0.326=0.111,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=0.6126x+0.0162，計(jì)算 x=0.155 ，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
D-LDH 活性(U/g質(zhì)量)=66.67×x÷W×F =94.653 U/g質(zhì)量
2 、取0.1018g 擬南芥加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測(cè)定步驟操作， 用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.256-0.207=0.049，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=0.6126x+0.0162，計(jì)算x=0.054，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：D-LDH 活性(U/g質(zhì)量)=66.67×x÷W×F =35.065 U/g質(zhì)量
3 、取500萬(wàn)細(xì)胞樣本加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿， 按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.249-0.195=0.054，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=0.6126x+0.0162，計(jì)算x=0.062，按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)目計(jì)算酶 活得：
D-LDH 活性(U/10? cell)=0.133×x×F =0.008U/10? cell
4 、取50μL胎牛血清，按照測(cè)定步驟操作， 用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.360-0.217= 0.143 ,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=0.6126x+0.0162，計(jì)算 x=0.207 ，
按液體體積計(jì)算酶活得：
D-LDH 活性(U/mL)=66.67×x×F =13.800 U/mL
