酶聯免疫吸附測定（ELISA）是一種標記免疫測定技術。這種技術是使用最廣泛的技術，也是一種快速簡單技術，它是利于抗原與抗體特異性結合進行定性和定量分析。ELISA實驗是最靈敏的免疫分析方法之一，廣泛應用各種研究和行業，包括環境、食品安全、制藥和疾病標志物診斷。
目錄
一、ELISA基本原理
在ELISA實驗中，目標分子（抗原或抗體）被固定在酶標板（96孔）上，然后加入含有酶標記抗體或抗原溶液，如果樣本中含有目標分子，它們將與固定在酶標板上抗體或抗原特異性結合。最后，加入酶底物，在酶的催化下，底物發生化學反應，產色有色產物，顏色的深淺與目標分子的量呈正相關。最后，通過檢測儀器對顏色進行定量分析，既可得目標分子的含量。
二、ELISA操作流程
ELISA操作流程基本包括包被、加樣、洗滌、酶標記、洗滌、底物顯色和檢測等，下面為大家詳細介紹：
包被。包被是ELISA第一步，將抗原或抗體以適當濃度（通常在1-10µg/mL）稀釋后，加到固相載體（如96微孔板）中。在4℃過夜或在室溫下孵育1-2個小時，使其結合。孵育后，用洗滌緩沖液（如PBS或TBST）洗滌3次，去除未結合的成分。
加樣。將待檢測樣本（可根據需要稀釋）加入固相載體中。在適宜的條件下（如37℃孵育一小時）使樣本中的目標分子與固相載體上抗原或抗體結合。
洗滌。使用洗滌緩沖液洗滌3-5次，以去除未結合的成份，減少背景干擾。
酶標記。加入酶標記的抗原或抗體，通常稀釋度為1：1000至1:5000。在37℃孵育一小時，使其與結合目標分子形成穩定復合物。
洗滌。再次使用洗滌緩沖液洗滌3-5次，去除未結合的成分。
底物顯色。加入適量的酶底物（如TMB或OPD），并在適宜的條件下（如室溫孵育15-30分鐘）進行反應。監測反應的顯色，直到達到所需顏色深度。
檢測。使用酶標儀在適度波長（如450nm）下測定顯色產物的吸光度，進行定量分析得出目標分子含量。
ELISA應用領域
ELISA應用領域較為廣泛，在生物學研究中，ELISA可以用來檢測細胞因子、生長因子、激素等活性物質，了解其在細胞生長、分化、凋亡等過程作用。
在醫學診斷領域，ELISA技術廣泛應用各種傳染病、腫瘤、自身免疫性疾病診斷和檢測。例如乙肝病毒、艾滋病病毒、腫瘤標志物等均可通過ELISA進行檢測。
在食品安全領域，ELISA技術可以檢測食品中農藥殘留、獸藥殘留、毒素等的檢測，保障食品安全等。
環境檢測領域，ELISA技術可以檢測水體、土壤等環境樣品中的有害物質，如重金屬、有機污染物等，為環境保護提供支持！
ELISA注意事項
在進行ELISA實驗，了解ELISA注意事項可以在實驗中少走彎路。下面是紀寧生物為大家總結一些實驗注意事項：
1、如果是ELISA，可以在一周內采集并檢測樣品，并保存在2-8°C。如果未及時完成檢測，請將樣品分割并冷凍在-20°C或-80°C，以避免重復凍融。
2、ELISA試劑盒的檢測范圍與樣品中分析物的濃度范圍不一樣。建議在實驗前根據相關文獻估算模型中分析物的濃度，并通過初步實驗確定選擇。
3、應仔細收集ELISA血清樣品，以避免溶血，因為紅細胞裂解會釋放具有過氧化物酶活性的物質，并且溶血的發作可能會增加非特異性顯色。
4、如果存在細菌污染，標本必須新鮮檢測。細菌可能含有內源性HRP，可能會導致假陽性反應。如果在冰箱中保存時間過長，可能會發生聚合反應，間接法ELISA會在背景下加深。
5、ELISA樣品處理實驗中，如果樣品反復凍融，蛋白效價會降低，因此建議多次冷凍少量待測樣品。
上述是紀寧為大家介紹ELISA原理，通過對原理認識有助于了解認識ELISA實驗流程。如果您對原理還有疑問，歡迎私信。上海紀寧是一家專注于生物、生化領域產品銷售，主要經營的有ELISA試劑盒、生化試劑、抗體、標準品、對照品、細胞、血清、培養基等生化科研試劑產品。
QQ：2881498722 
手機號碼：15800441226
服務電話：021-54721350
E-mail：2881498722@qq.com
公司地址：上海市金山工業區亭衛公路6558號9幢2447-12室