細胞傳代培養是細胞培養的常規方法之一，當細胞隨著培養時間的延長和細胞分裂時，細胞之間會發生接觸和接觸，生長速度減慢甚至停止，并且也會因營養不足和代謝產物的積累而不利于細胞生長或中毒。因此，一旦細胞在培養瓶中長滿，就需要稀釋并接種到多個培養瓶中，細胞才能繼續生長。

　　細胞傳代目的 不僅可以擴大細胞培養數量，還可以避免細胞因生長停滯甚至衰減而大量死亡的困境，因此，為了使細胞保持在對數生長期，維持細胞旺盛的分裂能力，此時需要進行細胞傳代。

　　為什么要對細胞進行分裂

　　一旦開始細胞培養，就無法無限期地生長，因為有限空間內的細胞數量不斷增加，營養物質消耗，以及毒性代謝物的增加最終導致細胞死亡。傳代培養或分裂細胞會產生比原始培養物細胞密度更低的新培養物。通過去除培養基并將細胞轉移到新鮮的生長培養基和基質中，細胞可以獲得新鮮的營養物質，并去除有毒代謝物，從而可以長期維持培養。最初接種細胞后，生長從滯后期開始，然后進入對數期，細胞呈指數增殖，然后進入生長率和死亡率相等的穩定期。（圖1）。在死亡階段，細胞因缺乏營養或培養條件不充分而死亡，例如當細胞因高或過度匯合而開始爭奪空間時。

　　圖1：細胞的生長曲線：培養細胞的生長曲線由四個階段組成：生長開始前的潛伏期（滯后期）、指數生長期（對數期）、細胞數量快速增長逐漸減緩的穩定期和細胞因缺乏營養和生活條件不當而死亡的死亡期。對數期應更換培養基，細胞應在達到穩定期之前進行傳代。

　　為了使細胞保持最佳培養條件并積極生長，必須定期更新生長培養基并進行傳代培養。根據細胞類型，對數期可以多次更換培養基。傳代培養細胞的最佳時間是在對數期和穩定期之間，即細胞匯合之前。

　　為什么要檢查細胞？

　　每天檢查細胞培養物（包括在傳代培養前檢查）非常重要，這是監測細胞健康狀況、檢查污染和確定何時分裂細胞的一種手段。首先可以用肉眼在宏觀層面檢查培養物是否有真菌污染、渾濁度和培養基中的顆粒以及培養基顏色變化指示的意外pH值變化。但應在高放大倍數下確認沒有細菌污染。此后，應使用倒置顯微鏡仔細檢查細胞的一般形態和生長模式。倒置顯微鏡的光學元件位于標本下方。因為細胞附著在培養皿底部，所以從這個角度可以輕松觀察到它們。觀察時應使用總放大倍數100–200倍和相差，因為大多數細胞在正常明場照明下難以觀察到。

　　如何對培養細胞進行傳代？

　　準備細胞進行傳代培養的最常用方法是使用胰蛋白酶等蛋白水解酶破壞細胞間和細胞與底物之間的鍵。胰蛋白酶與乙二胺四乙酸(EDTA)結合可使細胞脫離生長表面。胰蛋白酶切斷將細胞固定在培養皿上的粘著斑，EDTA充當鈣螯合劑。

　　根據細胞類型或下游實驗，可以使用其他蛋白酶替代胰蛋白酶，例如天然膠原酶或合成解離混合溶液。

　　通過去除鈣，參與細胞間相互作用的鈣粘蛋白被破壞，細胞彼此分離。一旦它們不再與生長表面和周圍細胞結合，就可以輕松地將它們分離并在新的細胞培養皿中生長。每種細胞類型的細胞培養條件和傳代培養方法各不相同。在整個傳代培養過程中，在無污染的環境中工作非常重要。在開始時、胰蛋白酶消化過程中、細胞計數和分裂后對細胞進行檢查是必不可少的。為了獲得一致的結果和跟蹤實驗，保存良好的記錄和文檔也很重要。

　　好了，今天紀寧生物為大家介紹細胞傳代，因篇幅有限，細胞傳代步驟單獨一篇文章為大家詳細介紹。細胞傳代對細胞培養是非常關鍵的步驟，它決定了下游實驗細胞培養的好壞。了解細胞傳代原理，為后續細胞培養步驟打下基礎。