紀寧生物土壤幾丁質酶測試盒測定原理
.jpg "土壤幾丁質酶測試盒")
土壤幾丁質酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）試劑盒說明書
注 意 ：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
幾丁質主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細胞壁中，而幾丁質酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。
測定原理：
幾丁質酶水解幾丁質產生 N-乙酰氨基葡萄糖，進一步與對二甲氨基苯甲醛產生紅色化合物，在 585nm 處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質酶的活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、水浴鍋、離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 65mL×1 瓶，4℃避光保存。
樣品處理：
新鮮土樣風干，過 30-50 目篩。
測定操作表：
對照管 測定管
土樣（g） 0.1 0.1
甲苯（μL） 15 15
混勻，25℃靜置 15min
蒸餾水（μL） 100
試劑一（μL） 100
混勻，37℃培養 24h
蒸餾水（μL） 200 200
4000rpm，4℃，離心 10min，取上清 200μL 于新的 EP 管中
試劑二（μL） 20 20
混勻，沸水浴 5min
試劑三（μL） 600 600
混勻，37℃顯色 20min，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸餾水調零，測定 585nm 處吸光值，記為 A 對照管和 A 測定管，ΔA=A 測定管-A 對照管。
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值 ΔA。
酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質產生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
土壤幾丁質酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000= 598×（ΔA +0.0007）
V 反總：反應體系總體積，0.315mL；W：樣本質量，0.1g；T：反應時間，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=2.6357x-0.0007，R
2=0.9989；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為吸光值 ΔA。
酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質產生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
土壤幾丁質酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V 反總÷W÷T×1000= 1195×（ΔA +0.0007）
V 反總：反應體系總體積，0.315mL；W：樣本質量，0.1g；T：反應時間，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL
注意事項：
試劑一充分混勻后再使用。
上海紀寧生物以誠信為本，努力打造的品牌，為您提供的土壤幾丁質酶測試盒售中、售前、售后服務，具有的技術團隊，把產品引入國內市場，滿足國內廣大客戶的需求，在二十一世紀生命科學蓬勃發展的時代，將緊跟生命科學的發展動態，為廣大科研學者探索生命的奧秘而奉獻綿薄之力！
QQ：2881498722 
手機號碼：15800441226
服務電話：021-54721350
E-mail：2881498722@qq.com
公司地址：上海市金山工業區亭衛公路6558號9幢2447-12室