英文名稱 ： Butyrylcholinesterase Activity Assay
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/48S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成 ：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
試劑一
|
液體100 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
粉劑×1瓶
|
-20℃保存
|
|
試劑三
|
液體30mL×1瓶
|
-20℃保存
|
產(chǎn)品說明：
丁酰膽堿酯酶(Butyrylcholinesterase，BchE，EC3.1.1.8)，又稱血漿膽堿酯酶，假性膽堿酯酶，是一種絲氨酸水解酶，由肝臟合成后進(jìn)入血液，幾乎存在于所有動物組織中。BchE結(jié)構(gòu)與乙酰膽堿酯酶(AchE)相似，但底物特異性和抑制劑敏感性不同。與AchE相比，BchE能夠有效水解較大的膽堿酯，如丁酰膽堿和苯甲酰膽堿，而且可以清除有機(jī)磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用。
有研究表明，BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點。BchE催化丁酰膽堿水解生成膽堿，膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿?DTNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB)；TNB在412nm處有吸收峰，通過測定412nm吸光度增加速率，計算BchE活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
注意事項：
為保證結(jié)果準(zhǔn)確，請嚴(yán)格控制反應(yīng)時間，建議兩人進(jìn)行實驗，一人加樣，一人計時。如果?A測定接近?A空白，可以增加樣本量后再進(jìn)行測定；如果A2測定大于1或ΔA測定大于0.7，建議將樣本上清用試劑一適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
1.取0.1018g大鼠肝臟樣本，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，離心后上清液用試劑一稀釋4倍，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定2-A測定1=0.6807-0.3913=0.2894，ΔA空白=A空白2-A空白1=0.3552-0.2931=0.0621，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.2273，按樣本質(zhì)量計算得：BchE活性(U/g質(zhì)量)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×10?]÷(W×V樣÷V樣總)÷T×F=2757.966U/g質(zhì)量。
2.取馬血清樣本，用試劑一稀釋64倍，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定2-A測定1=0.5100-0.3436=0.1664，ΔA空白=A空白2-A空白1=0.3552-0.2931=0.0621，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.1043，按液體體積計算得：BchE活性(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×10?]÷V樣÷T×F=2061.302U/mL。
