英文名稱 ： Total Protein Thiol Content Assay Kit
產品包裝 ： 盒裝
產品規(guī)格 ： 100T/96S
儲存條件 ： 2-8℃
檢測方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個月
產品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體 70 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體 70 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體 110 mL×2 瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體 20 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體 7 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體 1.2 mL×1 支
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2-8℃保存
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粉劑一
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粉劑×1 瓶
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2-8℃保存
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標準品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產品說明 ：
巰基的存在使得蛋白質能夠進行二硫鍵的形成，從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。巰基還參與到氧化還原反應中，具有重要的生物學作用。在細胞內，巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進展密切相關，因此巰基也成為了生物醫(yī)學領域中的重要研究對象。
本試劑盒測定的是蛋白質二硫鍵斷裂產生的巰基和本身游離巰基的總和。還原劑會使二硫鍵裂解生成巰基，巰基會發(fā)生親核反應，即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應，生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰，據此可以計算蛋白質總巰基含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、丙酮(AR)、蒸餾水。
注意事項：
若樣本ΔA測定<0.01，可適當增大樣本量后測定，注意同步修改空白管和標準管及計算公式；若樣本ΔA測定>1.5，可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。
實驗實例：
1、取100μL馬血清，按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.348-0.045=0.303，ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312，按樣本液體體積計算蛋白質總巰基含量得：蛋白質總巰基含量(μmol/mL)=2.5×ΔA測定÷ΔA標準×F=2.428μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.475-0.107=0.368，ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312，按樣本質量計算蛋白質總巰基含量得：蛋白質總巰基含量(μmol/g質量)=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F=2.846μmol/g質量。
