英文名稱 : Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
產品包裝 : 盒裝
產品規格 : 100T/48S
儲存條件 : 2-8℃
檢測方法 : 微量法
有 效 期 : 6個月
產品組成:
試劑名稱
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規格
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保存條件
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提取液一
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液體 40mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體40mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體120mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體7mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體1mL×1支
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2-8℃保存
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標準品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產品說明:
巰基的存在使得蛋白質能夠進行二硫鍵的形成,從而維持分子的穩定性和功能性。此外,巰基還參與到氧化 還原反應中,具有重要的生物學作用。在細胞內, 巰基含量的變化與多種疾病的發生和進展密切相關,因此巰基 也成為了生物醫學領域中的重要研究對象。
本試劑盒測定的是蛋白質中的游離巰基含量。一定條件下巰基會發生親核反應,即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應,生成黃色化合物,在 412nm處有最大吸收峰,據此可以計算蛋白質游離巰基含量。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、研缽/勻漿器、丙酮(AR)、蒸餾水。
注意事項:
1. 若樣本ΔA測定<0.01,可適當增大樣本量后測定,注意同步修改空白管和標準管及計算公式;若樣本ΔA測定>1.5 ,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定,注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。
2.可使用BCA法測定蛋白濃度。
實驗實例:
1、取 100μL馬血清,按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.113-0.047=0.066 ,ΔA標準=A 標準-A 空白=0.417-0.105=0.312,按樣本液體體積計算蛋白質游離巰基含量得:
蛋白質游離巰基含量(μmol/mL)=2.5×ΔA 測定÷ΔA 標準×F =0.529μmol/mL。
2 、取0.1036g鼠肝,按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.261-0.105=0.156,ΔA 標準=A 標準-A 空白=0.417-0.105=0.312,按樣本質量計算蛋白質游離巰基含量得:
蛋白質游離巰基含量(μmol/g質量)=0.25×ΔA測定÷ΔA 標準÷W×F =1.207μmol/g質量。
3、取 0.1078g 黃豆粉,沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后,按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.123-0.070=0.053,ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312,按樣本質量計算蛋白質游離巰基含量得:蛋白質游離巰基含量(μmol/g質量)=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.788μmol/g質量。