英文名稱 ： Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/48S
儲(chǔ)存條件 ： 2-8℃
檢測(cè)方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體 40mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體40mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體120mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體6mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體1.2mL×1瓶
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2-8℃保存
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粉劑一
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粉劑×1瓶
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說明：
蛋白質(zhì)是一類重要的生物大分子，存在于一切生物體內(nèi)，是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)。二硫鍵是連接不同肽鏈或同一 肽鏈中，兩個(gè)不同半胱氨酸殘基的巰基的化學(xué)鍵。二硫鍵對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)影響很大，在蛋白質(zhì)分子中，起著穩(wěn)定 肽鏈空間結(jié)構(gòu)的作用，所以測(cè)定蛋白質(zhì)二硫鍵含量尤為重要。
還原劑會(huì)使二硫鍵裂解,裂解后的巰基會(huì)發(fā)生親核反應(yīng)， 即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰，據(jù)此可以計(jì)算蛋白質(zhì)二硫鍵含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機(jī)、研缽/勻漿器、丙酮(AR)、蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1.若樣本ΔA測(cè)定<0.01 ，可適當(dāng)增大樣本量后測(cè)定，注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計(jì)算公式；若樣本ΔA測(cè) 定>1.5,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、取 100μL 馬血清，按照測(cè)定步驟操作，用 96 孔板測(cè)得 ΔA 測(cè)定=(A2測(cè)定-A1測(cè)定)-(A2 對(duì)照-A1 對(duì)照)=(0.348-0.113)-(0.047-0.045)=0.233 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.417-0.105=0.312，按樣本液體體積計(jì)算蛋 白質(zhì)二硫鍵含量得：
蛋白質(zhì)二硫鍵含量(μmol/mL)= 1.25×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)×F =0.933μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=(A2 測(cè)定-A1 測(cè)定)-(A2 對(duì)照-A1 對(duì)照)=(0.475-0.107)-(0.261-0.105)=0.212,ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.417-0.105=0.312，按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì) 二硫鍵含量得：
蛋白質(zhì)二硫鍵含量(μmol/g質(zhì)量)=0.125×ΔA測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.820μmol/g質(zhì)量。
3、取 0. 1078g 黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋 2 倍后， 按照測(cè)定步驟操作， 用 96 孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=(A2 測(cè) 定-A1測(cè)定)-(A2對(duì)照-A1對(duì)照)=(0.762-0.084)-(0.123-0.070)=0.625 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白 =0.417-0.105=0.312，按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)二硫鍵含量得：
蛋白質(zhì)二硫鍵含量(μmol/g質(zhì)量)=0.125×ΔA測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =4.646μmol/g質(zhì)量。
