英文名稱 :Cysteinyl Sulfoxide Lyase(CSL)Activity Assay Kit
產品包裝 :盒裝
產品規格 :100T/48S
儲存條件 :2-8℃
檢測方法 :微量法
有 效 期 :6個月
產品組成:
試劑名稱
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規格
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保存條件
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提取液
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液體60mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體1.5mL×1支
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體3mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體3mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑五
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液體12mL×1瓶
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2-8℃保存
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標準品
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液體1mL×1支
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2-8℃保存
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產品說明:
半胱氨酰亞砜裂解酶,簡稱蒜酶,又名蒜氨酸酶。半胱氨酰亞砜裂解酶幾乎存在于所有蔥屬植物中,如大蒜,洋蔥,韭菜等。蒜氨酸酶存在于液泡內,其天然底物蒜氨酸存在于細胞質中;蒜氨酸酶與蒜氨酸接觸并催化產生蒜素和順、反式阿霍烯并生成丙酮酸和氨等副產物,也是大蒜等植物辛辣氣味的主要來源。
半胱酰胺亞砜裂解酶可以催化S-甲基-L-半胱氨酸亞砜生成丙酮酸。丙酮酸可與2,4-二硝基苯肼反應生成2,4-二硝基苯腙,在堿性條件下顯棕紅色;測定505nm吸光度的變化,即可計算CSL酶活性。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養箱、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水和冰。
注意事項:
1.如果測定結果?A測定>1,可以對樣本用蒸餾水進行稀釋或者縮短第一步反應時間;吸光值較小,可以加大樣本量或者延長第一步反應時間至1h或者更長時間。注意計算時同步修改計算公式。
2.對于初次測定樣本,建議將樣本勻漿液用蒸餾水進行梯度稀釋后測定,選取佳的稀釋倍數。洋蔥、香菇、大蒜類樣本建議直接稀釋4-10倍后再進行佳稀釋倍數摸索。(實驗室洋蔥進行了8倍稀釋,蒜進行了64倍稀釋)
實驗實例:
1、稱取0.1233g蒜樣本,加入提取液進行冰浴勻漿,上清用蒸餾水稀釋64倍,按照測定步驟操作,用96孔板測
得計算?A測定=A測定-A對照=0.46-0.113=0.347,?A標準=A標準-A標準空白=0.551-0.064=0.487,帶入公式計算:CSL活性(U/g質量)=0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=7.693U/g質量。
2、稱取0.1263g洋蔥樣本,加入提取液進行冰浴勻漿,上清稀釋4倍,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算
?A測定=A測定-A對照=0.477-0.382=0.095,?A標準=A標準-A標準空白=0.551-0.056=0.487,帶入公式計算:CSL活性(U/g質量)=0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=0.169U/g質量。