一、基本信息

細胞名稱

(NCI-H460/DDP)人大細胞肺癌順鉑耐藥株

細胞編號

JN-CC2324

細胞品牌

紀寧生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

細胞來源

人

生長特征

貼壁生長

細胞形態(tài)

上皮樣

細胞代數(shù)

10代以內(nèi)

培 養(yǎng) 基

RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBSNCI-H460/cis完全培養(yǎng)基

重要提醒

培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基是不含藥物的，待細胞狀態(tài)良好，穩(wěn)定生長時，可以用含加含40nM的吉西他濱藥物培養(yǎng)基處理48h，期間若有部分細胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液去掉即可。凍存時請不要在培養(yǎng)基中加藥物。

傳代方法

1：2傳代

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

觀察

1、收到細胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。

3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入37度培養(yǎng)箱中靜置3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。

貼壁

未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首次傳代，建議1:2傳代（兩個T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進行對比培養(yǎng)。）

二、細胞培養(yǎng)操作

T25瓶－細胞操作

收貨處理

用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1:2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。
是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min。

3、棄上清，沉淀細胞用1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，后放入37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項

個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，后放入 37℃,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

凍存管－細胞操作

收貨處理

1. 收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。

2. 將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3、復蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

傳代密度

第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例

一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項

1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察
若未融化可以將細胞按正常步驟保存。

2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞。

凍存－細胞操作

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5mi。

3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的富衡無血清凍存液（FH7001），混勻后加入凍存管中。如：凍一支，加入1ml無血清凍存液）

4、 將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放24小時以上。

三、售后服務

細胞予重發(fā)

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。

6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細胞不重發(fā)

1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

四、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或?qū)嶒瀱栴}，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。