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99-20-7/海藻糖的制備及相關研究

背景及概述

海藻糖是由兩個吡喃環葡萄糖分子以α,α-1,1鍵連接而成的非還原性雙糖,海藻糖在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環境條件下能穩定細胞膜和蛋白質的結構,有效地保護細胞膜和蛋白質分子不變性失活,從而維持生物體的生命過程和生物特征,因此海藻糖對生物體具有神奇的保護作用。因為海藻糖具有此獨特功能,使其可以作為 蛋白質藥物、酶、疫苗和其他生物制品的優良活性保護劑以外,還是保持細胞活性、保濕類化妝品的重要成分,更可作為防止食品劣化、保持食品新鮮風味、提升食品品質的 獨特食品配料,大大拓展了海藻糖作為天然食用甜味糖的功能。目前海藻糖廣泛應用于食品、農業、醫藥等領域。

兩分子D-吡喃葡萄糖的異頭碳原子(C1)上的半縮醛羥基之間去水縮合而成的非還原性雙糖。分三種:α,α-海藻糖、α,β-海藻糖和β,β-海藻糖。第一種最常見,后二種極少見。α,α-海藻糖的化學結構式如下。作為貯存性糖廣泛存在于生物界。在昆蟲、無脊椎動物、酵母、真菌、藻類、蕨類以及高等植物中均發現其存在。是卷柏屬植物光合產物的一種運輸形式。

用途:食品添加劑,甜味劑,本品甜度相當于蔗糖45%;將本品添加到含水蛋白食品中,在冰點以上冷凍干燥,可使食品不變質;因本品為非還原性糖,與氨基酸及蛋白質共同加熱時,不會發生褐變反應(Maillard reaction);本品耐酸、耐熱性好,加到食品中不變色、不分解、易消化、易吸收,與蔗糖相比,產生齲齒性小;可防止淀粉老化,化妝品方面,用于護膚品,保持皮膚的高水分;用于唇膏基料;也可用于化妝水、面乳、香精。醫藥方面,用作試劑;臟器移植的保存液;酶穩定劑等。

制法:利用淀粉為原料,液化,用耐熱性 α-淀粉酶發酵、糖化,再用異構化淀粉酶作用,生成粗制品,分離,脫色,過濾,離子交換脫鹽,過濾,濃縮,結晶,分離,干燥,可制得。

海藻糖的制備及相關研究

制備

一種利用固定化海藻糖合成酶生產海藻糖的方法,包括如下步驟:

(1)將熱帶假絲酵母接種于發酵培養基中,在溫度28℃的條件下,培養70h,制得發酵液;上述發酵培養基組分如下,均為重量百分比:麥芽糖3%,蛋白胨0.6%,牛肉膏0.4%,KH2PO40.1%,MgSO4•7H2O0.06%;余量水,pH6.0;

(2)將步驟(1)制得的發酵液在4℃條件下進行6000r/min冷凍離心20min,收 集濕菌體,用濃度1mol/L的磷酸鈉緩沖液懸浮菌體,制成菌懸液,再采用高壓均質機, 在溫度為4℃,破碎壓強為140Mpa的條件下,進行菌體的破碎,4℃條件下6000r/min 冷凍離心10min后,收集所得的上清液即為粗酶液;
在攪拌狀態下,將固體硫酸銨粉末加入粗酶液中至濃度達到25℃條件下硫酸銨飽和度的30%,離心后取上清液,制得的海藻糖合成酶液的酶活為54U/g濕菌體;

(3)在戊二醛質量濃度為0.5%,海藻糖合成酶液與殼聚糖凝膠的體積質量比為6:1、 pH8.0、溫度15℃的條件下,體積質量比單位為ml/g,進行交聯包埋反應13h,制得固定化海藻糖合成酶;

(4)配制質量濃度10%的麥芽糖溶液,調節pH7.8,制得麥芽糖底物溶液;

將步驟(3)制得的固定化海藻糖合成酶與麥芽糖底物溶液按4:1的體積比混合, 經43℃、攪拌速度為150r/min的條件下轉化24h、用14目的濾網過濾分離,濾液即為海藻糖,濾渣為固定化海藻糖合成酶,經清水浸泡4h后,重復利用。

經檢測,初次轉化率為70%,固定化海藻糖合成酶重復利用10次后轉化率為68%, 固定化海藻糖合成酶重復利用20次后轉化率為65%,平均每次生產時間為22小時,且重復生產20次的過程中,未染雜菌。

相關研究

張本光等人研究了低溫環境對淡色庫蚊體內海藻糖和海藻糖酶含量的影響。方法 在4℃環境中對淡色庫蚊四齡初幼蟲和雌成蚊分別冷處理0、1、3、6、12、18、24 h和0、1、3、6、12、18、24、36、48、72 h,采用酶聯免疫吸附法測定低溫處理不同時間淡色庫蚊幼蟲和成蚊體內海藻糖和海藻糖酶含量。結果:經低溫處理后,淡色庫蚊幼蟲和雌成蚊體內海藻糖和海藻糖酶平均含量均明顯增加。幼蟲和雌成蚊體內海藻糖變化趨勢一致,均在低溫處理3 h達到最大值,平均值分別為(2.458 8±0.379 2)mg/g和(2.825 7±0.211 1)mg/g。海藻糖和海藻糖酶在低溫處理前6 h內變化幅度較大,經過一段時間適應后,穩定保持在相對較高水平。結論:低溫能快速誘導淡色庫蚊體內海藻糖和海藻糖酶產生,海藻糖和海藻糖酶在提高淡色庫蚊抗寒性方面可能發揮重要作用。

主要參考資料

[1] [中國發明,中國發明授權] CN201310182033.8 一種利用固定化海藻糖合成酶生產海藻糖的方法

[2] 農業大詞典

[3] 實用精細化工辭典

[4]張本光,李亞平,馬榮,程鵬,郭秀霞,王海防,劉麗娟.低溫對淡色庫蚊海藻糖和海藻糖酶的影響[J/OL].中國血吸蟲病防治雜志:1-3[2019-08-24].https://doi.org/10.16250/j.32.1374.2018131