9013-18-7 / 酰基輔酶A合成酶的應(yīng)用及PH穩(wěn)定性

背景及概述^[1][5]

存在于生物體紅細(xì)胞膜的酰基輔酶A合成酶具有兩種不同的存在形式，一種為長鏈酰基輔酶A合成酶，而另一種與人肝臟中的長鏈酰基輔酶A具有較高的相似性。其中第一種長鏈酰基輔酶A較為常見，其在紅細(xì)胞膜脂肪酰代謝過程中起著重要的調(diào)控作用。該酶在生物體內(nèi)調(diào)控著磷酸脂酰基化與去酰基化、紅細(xì)胞膜蛋白酰基化等多種重要生物學(xué)過程的發(fā)生，并在線立體脂肪酸β氧化及質(zhì)膜酰基化反應(yīng)中起重要的調(diào)節(jié)作用。

人們已從多種不同的生物體內(nèi)克隆得到了多種不同的酰基輔酶A合成酶。1999年，Kiran等人又從人紅細(xì)胞中克隆得到了一新的酰基輔酶A合成酶，并對該蛋白的結(jié)構(gòu)及功能進(jìn)行了研究。該蛋白與已知的各種酰基輔酶A合成酶具有相似的結(jié)構(gòu)及功能特征。其與各種紅細(xì)胞長鏈酰基輔酶A合成酶在蛋白序列中高度同源，且亦在各種脂肪酸代謝過程如脂肪酸β氧化、紅細(xì)胞膜酰基化等過程中起著極為重要的作用。由上可知，該酶為酰基輔酶A合成酶蛋白家族地新成員，并與已知的該蛋白家族的成員具有相似的結(jié)構(gòu)及功能。該蛋白在生物體內(nèi)參與調(diào)控多種重要的脂肪酸代謝途徑，其突變或表達(dá)異常將導(dǎo)致體內(nèi)相關(guān)代謝途徑的異常，進(jìn)而引發(fā)各種相關(guān)的疾病。其在生物體內(nèi)通常與各種脂肪酸代謝紊亂性疾病及與之相關(guān)的各種代謝紊亂性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種疾病。

CN201310728420.7 采用乙酸鹽，磷酸鹽，Tris和甘氨酸/NaOH緩沖溶液，調(diào)節(jié)pH4.0至10.5，測定酰基輔酶A合成酶的pH穩(wěn)定性。結(jié)果如下圖所示，酰基輔酶A合成酶的最適pH為9.5。下圖為不同pH緩沖液對ACS1活性的影響；（-◆-：Acetate；-■-：Phosphate；-▲-：Tris；-×-：Glycine）。

應(yīng)用^[2-3]

CN201811336556.2公開了一種基于微量法的血清游離脂肪酸含量測定試劑盒及方法，該試劑盒的試劑包括由Tris、HCl和水組成的試劑一，由酰基輔酶A合成酶、ATP、MgCL、CoA和DTT組成的試劑二，由焦磷酸酶組成的試劑三，由抗壞血酸組成的試劑四，由鉬酸銨、酒石酸銻鉀、水、濃硫酸組成的試劑五；該方法的原理為利用焦磷酸酶分解合成脂酰輔酶A時產(chǎn)生的焦磷酸產(chǎn)生正磷酸鹽，再用鉬銻抗比色法測定正磷酸鹽含量，來間接測定游離脂肪酸含量。本發(fā)明改進(jìn)了常規(guī)酶學(xué)法，降低了測定成本，簡化了測定步驟，與傳統(tǒng)測定方法相比，儀器要求低，成本較為低廉，符合普通實驗室的測定條件，檢測限更低，適用范圍廣，顯色穩(wěn)定，重復(fù)性較好。

CN200810173919.5報道了以新的代謝途徑方式由可再生的原材料通過發(fā)酵獲得丙酮。本發(fā)明涉及由乙酰輔酶A起始制備丙酮的方法，該方法包括：步驟A，由乙酰輔酶A酶促轉(zhuǎn)化為乙酰乙酰輔酶A；步驟B，由乙酰乙酰輔酶A酶促轉(zhuǎn)化為乙酰乙酸和輔酶A；以及，步驟C，由乙酰乙酸脫羧產(chǎn)生丙酮和CO2，其特征在于，在步驟B中，輔酶A不轉(zhuǎn)移到受體分子中。此外，出人意料地，步驟B由酰基輔酶A硫酯酶、酰基輔酶A合成酶或酰基輔酶A硫激酶類催化。本發(fā)明涉及一種全新的代謝途徑，這是因為迄今為止沒有報道過任何微生物酶在不同時發(fā)生輔酶A向受體分子轉(zhuǎn)移的情況下酶水解乙酰乙酰輔酶A。

病理研究^[4]

孟赫禹等人探討了外周血中長鏈酰基輔酶A合成酶(ACSL)1基因高表達(dá)是否可能作為急性心肌梗死風(fēng)險評估的遺傳標(biāo)記及參與急性心肌梗死發(fā)病的可能機(jī)制。方法：在中國北方漢族人群中,選取急性心肌梗死病人75例為病例組,非冠心病者70例為對照組。詳細(xì)記錄每例研究對象的臨床資料。分別采用實時熒光定量PCR及Western印跡檢測ACSL1基因在mRNA水平及蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果：在中國北方漢族人群中,急性心肌梗死病人外周血白細(xì)胞中ACSL1基因在mRNA水平以及蛋白水平表達(dá)均增高;Logistic回歸分析顯示:ACSL1基因表達(dá)量增高是急性心肌梗死獨(dú)立危險因素;ACSL1基因的表達(dá)量越高,冠狀動脈粥樣硬化病變程度越重。急性心肌梗死組空腹血糖、總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白水平均高于對照組,高密度脂蛋白低于對照組。結(jié)論：ACSL1基因在急性心肌梗死病人外周血白細(xì)胞中表達(dá)顯著增高;ACSL1基因表達(dá)量增高是急性心肌梗死獨(dú)立危險因素;外周血中ACSL1的高表達(dá)可能作為急性心肌梗死風(fēng)險評估的分子標(biāo)記。

參考文獻(xiàn)

[1][中國發(fā)明]CN00116966.1一種新的多肽——人酰基輔酶A合成酶11.77和編碼這種多肽的多核苷酸

[2]CN201811336556.2一種基于微量法的血清游離脂肪酸含量測定試劑盒及方法

[3]CN200810173919.5以新的代謝途徑方式由可再生的原材料通過發(fā)酵獲得丙酮

[4]孟赫禹,崔蘭.外周血中長鏈酰基輔酶A合成酶1基因高表達(dá)在急性心肌梗死風(fēng)險評估中的意義[J].中國老年學(xué)雜志,2017,37(12):2921-2924.

[5][中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201310728420.7 一種酰基輔酶A合成酶及其應(yīng)用