9002-12-4/尿酸酶_腎臟病用藥

尿酸酶又稱尿酸氧化酶、環拉酸，由黑曲霉（Aspergillus niger），黃曲霉等發酵液提取而得。常溫下為灰白色或褐綠色結晶或光亮透明片狀物。分子量9300。幾乎不溶于水，微溶于堿性緩沖液。PH值6.3，酶活性受氰化物抑制。尿酸酶能催化尿酸迅速氧化，最終生成尿囊酸。可用于治療尿酸結石及腎功能衰竭所致的高尿酸血癥。也用于測定血清及尿中的尿酸量。

【藥性與應用】
尿酸酶能催化尿酸迅速氧化變成尿囊酸，不再被腎小管重吸收而排泄，從而降低血漿中尿酸含量。用于不能口服抑制尿酸生成劑的病人。對尿酸結石、結節性痛風、白血病、腎衰竭等因素引起的高尿酸血癥均有良效。
肌內注射或靜脈注射： 1000單位/d。可根據病情適當調整劑量。

【注意與禁忌】
可有全身蕁麻疹樣瘙癢，肌內注射部位發紅。為異性蛋白制劑，易引起過敏反應。

尿酸是嘌呤分解代謝的最終產物。由腎臟隨尿液排出體外。健康成人體內尿酸含量約為1.1g，其中約15%存在于血液中，血液中尿酸經腎小球過濾后，大部分由腎小管重吸收。尿酸是血漿中非蛋白氮重要成分之一，在嚴重腎臟損害時，血中尿酸可顯著升高。而輕度受損時變化不大。故血尿酸測定是診斷腎重度受損的敏感指標，參考數值：男性：208-428 女性：155-357(μmol/L)。

屎酸是鳥類、爬行類和包括人在內的靈長類動物體內嘌呤代謝的終產物，因為在這些動物體內缺乏以分子氧為受體催化尿酸進一步分解為尿囊索、co2和H2O2的屎酸酶·尿酸作為人體嘌呤代謝的終產物經腎臟排泄，當尿酸生成超過腎臟捧泄刊，例如富嘌呤食物掇入過多以及白血病和淋巴瘤及其化療過程所引起的嘌呤代謝劇增；或者當腎臟處于病理狀態時使正常產生的尿酸捧泄受阻，這兩種狀況都會造成血漿尿酸顯著升高，形成高尿酸血癥。

【臨床意義】
(1)血尿酸增高：
①急慢性腎炎血尿酸明顯增高，且較BUN、Cr更顯著，出現更早。其他腎病晚期，如腎結核、腎盂腎炎、腎積水等血尿酸亦增高。因腎外因素影響較大，故其升高程度并不與腎功能受損程度成正比
②痛風，由核蛋白及嘌呤代謝紊亂所致，血尿酸>595μmol/L。
③白血病，多發性骨髓瘤，真性紅細胞增多癥等因核酸代謝分解增加使血尿酸增加。
④其他：氯仿、四氯化碳、鉛中毒、子癇、妊娠反應、劇烈運動等。
(2)血尿酸減少：較少見，見于惡性貧血、乳糜瀉等。

【痛風和高尿酸血癥】
痛風的生化特征是高尿酸血癥，臨床則以嚴重的急性關節炎發作為其特色。未治病例可按以下四期發展：(1)無癥狀性高尿酸血癥，少數發展為急性痛風;(2)急性痛風性關節炎，常為單關節性，但亦可為多關節受累;(3)無癥狀間歇期;(4)慢性砂礫性痛風伴慢性關節炎(30～40%痛風病人發生痛風石)。如能及早診斷，及時給予適當治療，痛風常能制止，破壞性關節損害及尿路結石等合并癥亦可防止。

有些痛風病人發生間質性腎炎。但腎臟病變源出血管病、高血壓、鉛中毒者實更常見，還可能是獨立的腎臟疾患。腎結石可能是由于尿酸排出增多引起的。但以降尿酸藥物治療，不能使進行性腎功能不全好轉，因為它與高尿酸血癥是無關的(Beck，1986)。

作為急性痛風性關節炎臨床征象內在基礎的高尿酸血癥，常有原發和繼發之分。原發性高尿酸血癥可由于尿酸生成過多或腎臟對尿酸排出的減少，或二者兼有。但尿酸產生過多的機理，多數病例仍屬不明。次黃嘌呤鳥嘌呤轉磷酸核糖基酶(hypoxanthine-guanine-phosphoribosyl transferase)缺乏或磷酸核糖基焦磷酸合成酶(phosphoribosyl-pyrophosphate syn-thetase)活力增高，都可使5-磷酸核糖-1-焦磷酸(5-phosphoribosyl-1-pyrophosphate)水平增高，從而促使尿酸合成增多(Rodnan等，1983)。

腎臟對尿酸的清除障礙，比尿酸生成過多常見得多。很多痛風病人腎臟排泄尿酸的機能都有缺陷，而這種排泄機能的完整，則有賴于濾過、回收、分泌和分泌后回收四步模式的完整。原發性高尿酸血癥的最可能機制是腎小管分泌減少或其回收增多。

繼發性高尿酸血癥則是在另一疾病過程中發生的，或為某種外在性沉積過程的結果(如藥物治療)。像原發性高尿酸血癥一樣，繼發性高尿酸血癥的內在病因也不外生成過多及腎排出減少。如骨髓增生性病變時，骨髓活動亢進，來自細胞和核酸的尿酸生成與周轉都增多，致使血中尿酸濃度增高。利尿治療及長期飲酒，可使腎臟對尿酸的排出削弱，血中尿酸濃度亦可增高。

男子和絕經期后婦女以尿酸酶測定的血清尿酸濃度超逾7mg/dl時，一般即有急性痛風的癥狀發生。因為血清尿酸濃度達此水平，就會促使尿酸一鈉晶體在滑膜組織和滑液中沉淀下來，終而導致急性炎癥的發作。此中確切機理仍未盡悉，但知與此過程有關的改變涉及白細胞對晶體的吞噬，激肽釋放酶和補體系統活化，白細胞內溶酶體破裂，以及最終整個細胞解體，釋出溶酶體酶進入滑液(Kelley和Palella，1987)。

痛風在婦女中頗為稀見，已報道病例中，僅占5.2%。利尿療法、腎功能不全和絕經期后，皆與痛風有明顯關連。除此以外，包括血清尿酸水平在內的各方面表現，皆與男子痛風相似(Krane，1986;Lally等，1986)。

很多病變都伴有高尿酸血癥，急性痛風癥狀，可與另幾種類型的關節炎相似。檢出痛風石或由滑液白細胞中檢出尿酸一鈉結晶，即可診斷痛風。再者，根據高尿酸血癥、單關節受累并有發作間歇期的關節炎以及秋水仙堿治療立即奏效等表現，一般亦可與其他類似病變鑒別開來。

【血清尿酸-尿酸酶紫外線法】
尿酸在尿酸酶催化下氧化生成尿囊素，尿酸在293nm處有特定的吸收峰，隨著尿酸的不斷被氧化，吸光度也隨之成比例降低。反應式如下：
尿酸--（尿酸酶）--尿囊素+H2O2+CO2↑
用生化自動分析儀或帶有293nm波長及具有恒溫裝置的分光光度計檢測，溫度30℃，反應時間3～5min，樣品與尿酸酶溶液比例為1∶30。
正常參考值：90～420μmol/L。臨床意義同酶耦聯測定法。

【聚乙二醇化尿酸酶的制備、純化及性質研究】
尿酸酶分解嘌呤代謝最終產物尿酸，生成水溶性更強，更易分解的尿囊素。當尿酸在血液中沉積，引起腎衰竭以及痛風等疾病。尿酸酶針對禁忌常規治療和常規療法無效的患者，能快速降低血液中尿酸鹽的含量。但作為外源蛋白有較高抗原性，影響了尿酸酶的活性。需要在尿酸酶分子表面結合一種水溶性高聚物，從而降低尿酸酶的抗原性，延長它在體內的半衰期。 蛋白質PEG修飾技術在過去的20年中得到了快速發展，已有多篇文獻報道了經PEG修飾的蛋白質藥物降低了免疫原性、提高了穩定性、延長了半衰期，并用于臨床治療各種疾病。本文研究尿酸酶聚乙二醇修飾的條件、純化方法以及修飾產物生物學活性和酶動力學性質的改變。 通過對溫度、pH、尿酸酶濃度、PEG和尿酸酶質量比等條件的篩選，確定pH8.5，4℃，尿酸酶與PEG_2-NHS質量比1：10，尿酸酶濃度2mg／mL為最佳修飾條件，10min內反應完全。 凝膠過濾層析測定尿酸酶分子量為70kD，結合還原和非還原性SDS-PAGE判斷尿酸酶由兩條分子量30kD的亞基通過二硫鍵組合而成。制備型PAGE電泳分離純化后，尿酸酶和PEG-尿酸酶通過SDS-PAGE電泳檢測均為單一條帶。收集凝膠，回收反應混合液總活性的46.7％，目標產物130kD的PEG-尿酸酶占12％。 尿酸酶最適溫度和pH分別為40℃、pH8.5，經PEG修飾后，最適溫度和pH變為35℃、pH8.0。修飾前后的尿酸酶在pH7.5-9.0范圍內，溫度40℃以下都比較穩定，PEG-尿酸酶在各個pH范圍內都比尿酸酶相對穩定，修飾后尿酸酶的熱穩定性也有所提高。在最適條件下，測定尿酸酶和PEG-尿酸酶Km分別為16.62×10~(-5)mol／L、17.8×10~(-5)mol／L。測定了尿酸酶和PEG-尿酸酶Km隨pH、溫度改變的變化情況，Km均高于最適條件得出的結果。 采用TNBS法測定尿酸酶的氨基修飾率為16.7％。修飾后的PEG-尿酸酶抗胰蛋白酶水解能力明顯高于未修飾的尿酸酶，在胰蛋白酶作用40min后仍保留原活性的20％，而尿酸酶在胰蛋白酶作用30min后活性就完全喪失。

屎酸酶是一種新型的降尿酸藥物，它以促進尿酸分解為藥物特征。因此從藥物生產來說，對屎酸酶的需要量也很大．由此可知，尿酸酶實在是一種很重要的醫藥用酶，做好相關產品的開發，具有較高的社會經濟敬益。