9001-60-9 / L-乳酸脫氫酶的制備

概述^[1]

L-乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶,存在于機體所有組織細胞的胞質內，其中以腎臟含量較高。L-乳酸脫氫酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，幾乎存在于所有組織中。在動物或微生物體中，乳酸脫氫酶(簡稱“LDH”)是以NADH為輔酶，將丙酮酸經過生化反應生成乳酸，因此乳酸脫氫酶是乳酸菌發酵的關鍵酶。自然界中存在L和D兩種依賴NADH的乳酸脫氫酶，分別催化丙酮酸生成L-乳酸和D-乳酸。在同時具有D-乳酸脫氫酶和L-乳酸脫氫酶的乳酸菌中，如果將D-乳酸脫氫酶缺失，就可以得到理論上光學純度為100％的L-乳酸。L-乳酸脫氫酶廣泛存在于微生物中，但目前只有少數乳桿菌屬的L-乳酸脫氫酶基因被克隆和測序。

L-乳酸脫氫酶偏高的原因^[3]

至于L-乳酸脫氫酶高的原因，有以下方面:

1.當乙肝病毒攜帶者病情惡化成乙肝患者時，部分肝細胞受損，血清中L-乳酸脫氫酶4和L-乳酸脫氫酶5含量就會有不同程度的增高。

2.乙肝治療方法特別是是用藥不當，長期服用同一種藥物時造成腎毒現象的產生。當腎毒現象出現時，血清中L-乳酸脫氫酶含量會迅速升高。

3.乙肝不進行合適積極的治療，發展到一定程度時會造成肝臟代謝嚴重異常，導致腎臟功能衰竭，從而也會引起L-乳酸脫氫酶含量升高。

4.肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉移所致的胸腹水時，會引起L-乳酸脫氫酶的偏高。

偏低的原因

L-乳酸脫氫酶存在于機體所有組織細胞的胞質內，其中以腎臟含量較高。血清L-乳酸脫氫酶正常范圍是100~300U/L，當出現乳酸脫氫酶偏低時，常見原因如下。

L-乳酸脫氫酶偏低的原因1:檢查過程中出現誤差;

L-乳酸脫氫酶偏低的原因2:內分泌失調;

L-乳酸脫氫酶偏低的原因3:過于勞累、睡眠不好、心情不好等。

總之，L-乳酸脫氫酶偏低一般不是很嚴重，經過調理即可恢復。但如果出現乳酸脫氫酶偏高就要引起重視了。因為肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉移所致的胸腹水時，會引起乳酸脫氫酶的偏高。

制備^[2]

于1mL離心管中加入300μL菌懸液(30mg濕菌體)和250μL磷酸鈉緩沖液(pH7.0)，37℃保溫5min，再依次加入50μL葡萄糖(終濃度50mmol/L)和400μL苯丙酮酸(終濃度10mmol/L)，反應1h后，取200μL反應液加入800μL甲醇終止反應，過0.22μm有機濾膜，進行HPLC分析；另取200μL反應液，用1mL乙酸乙酯進行萃取，上層有機相經無水硫酸鈉干燥后過0.22μm有機濾膜，進行對映選擇性分析。結果顯示，當體系反應40min后，L-PLA的濃度為5.62mmol/L，產率為56.2％，eep>99％，當反應80min后，苯丙酮酸完全被消耗，產生8.59mmol/L的L-乳酸脫氫酶，產率為85.9％，eep>99％。

主要參考資料

[1] 黃彥, 韋宇拓, 張黎, 陳發忠, & 黃日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脫氫酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達. 應用與環境生物學報(1), 70-73.

[2] 黃彥, 韋宇拓, 張黎, 陳發忠, & 黃日波. . 乳酸片球菌l-乳酸脫氫酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達. 應用與環境生物學報(1), 70-73.

[3] 楊壽鈞, & 蔡妙英. . 嗜熱菌的耐熱l—乳酸脫氫酶的研究. 微生物學報, 031(6), 438-442.