81029-05-2 / 亮甲酚藍的主要應用

背景及概述^[1]

亮甲酚藍是一種化工染料。

應用^[1-3]

1)亮甲酚藍染色對牛核移植胚胎體外發育的影響。為研究亮甲酚藍(brilliantcresylblue，BCB)染色選擇卵母細胞對牛核移植體系的影響，本實驗以未進行染色處理的牛卵丘-卵母細胞復合體(COCs)作為對照組，在成熟培養前用26μmol/L亮甲酚藍染色90min作為處理組，將處理組依照胞質的顏色分為藍色組(BCB+)和無色組(BCB-)，分別在成熟培養后作為受體，經胞質內注射法構建牛體細胞核移植胚胎，統計體細胞核移植的卵裂數、囊胚數和囊胚細胞數來評價其發育潛能。結果表明：BCB+組的成熟率(80.9%)與對照組(60.2%)和BCB-組(51.9%)差異顯著(P<0.05)；BCB+組的囊胚率(32.26%)與對照組(21.49%)和BCB-組(5.95%)差異顯著(P<0.05)，另外BCB+組的囊胚細胞總數(132.5)顯著高于其他組(P<0.05)。結果顯示，通過亮甲酚藍染色法篩選出成熟的高質量牛卵母細胞用于體細胞核移植，可以獲得更高的克隆囊胚率。

2)亮甲酚藍染色法評價斑馬魚卵母細胞體外成熟度的實驗研究。過不同濃度亮甲酚藍(BCB)對斑馬魚卵母細胞進行染色，探討該方法用于判斷魚類卵母細胞成熟度的可行性，并利用該法對孕酮促斑馬魚卵母細胞體外成熟實驗中的卵母細胞成熟情況進行了判斷和分析。結果表明：(1)BCB染色法用于判斷魚類卵母細胞成熟度是可行的。(2)低濃度(1nmol/L和10nmol/L)孕酮處理6h，對斑馬魚卵母細胞的成熟并無明顯促進作用，高濃度的孕酮(100nmol/L和1000nmol/L)不利于卵母細胞的成熟。(3)濃度為100nmol/L的孕酮處理12h，對卵母細胞成熟的促進作用顯著。

3)亮甲酚藍染色對水牛卵母細胞體外受精和孤雌激活胚胎發育的影響。探討亮甲酚藍(BCB)染色對水牛卵母細胞體外受精及孤雌激活胚胎發育的影響。卵丘卵母細胞復合體(COCs)在體外成熟培養前用濃度26μmol/L的亮甲酚藍染色90min，然后根據卵母細胞胞質藍色的有無分為陽性(BCB+，藍色)和陰性組(BCB-，不著色)。以未經染色處理的COCs為對照組，控制對照組卵母細胞在含0.4%牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸鹽緩沖液(DPBS)中孵育90min。體外成熟培養后統計各組的成熟率、體外受精和孤雌激活后的發育率。結果BCB+組的成熟率(65.70%)顯著高于對照組(59.86%)、控制對照組(58.42%)和BCB-組(48.86%)。在體外受精后的囊胚發育率方面，BCB+組(27.08%)和對照組(25.49%)差異不顯著，但顯著高于控制對照組(20.50%)和BCB-組(8.45%)。在孤雌激活后的囊胚發育率方面，BCB-組顯著低于其他各組，但BCB+組、對照組以及控制對照組之間無顯著差異。亮甲酚藍染色篩選出的陽性卵母細胞具有較好的核成熟發育潛能，但并不能顯著提高卵母細胞體外受精及孤雌激活后的胚胎發育率。

主要參考資料

[1] 亮甲酚藍染色對牛核移植胚胎體外發育的影響

[2] 亮甲酚藍染色法評價斑馬魚卵母細胞體外成熟度的實驗研究

[3] 亮甲酚藍染色對水牛卵母細胞體外受精和孤雌激活胚胎發育的影響