80863-62-3 / 阿力甜的測定

背景及概述^[1]

阿力甜是一種以天冬氨酸和丙氨酸為原料合成的二肽類人工合成甜味劑，其甜度為蔗糖的2000倍以上，比阿斯巴甜高10倍，具有口感好、甜度高和熱量低的優點，是蔗糖的替代品之一，性質穩定，廣泛應用于食品行業，可添加于乳制品，冷凍飲品，蜜餞，飲料，膠基糖果，果凍等食品中GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中對以上食品的最大使用限量均做出明確的規定。

阿力甜作為強甜味劑，一般被認為是無毒和刺激性的物質，WHO 規定阿力糖日允許攝入量可達 0.1 mg/kg。目前，阿力甜尚未被 FDA 認可，全世界只有中國、澳大利亞和墨西哥等6個國家批準使用，我國衛生部于1994年就已批準使用。1996年JECFA 確定的 ADI 值為 1mg/kg。

含量測定^[1]

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀（檢測器；DAD，型號：1260 廠家：美國 Agilent），電子天平（精確度：0.01mg 型號：BT125D，廠家：賽多利斯儀器有限公司），超聲波清洗器（型號：S180H，廠家：德國 ELMA）。漩渦混合器（型號：TYXH-II，廠家：TYXH-II），組織搗碎機（型號：JJ-2B，廠家：金壇市城東新瑞儀器廠）。

1.2 試劑

阿力甜標準品（來源：stanford Chemicals，批號：A161115-09；純度：98.09%），甲醇（色譜級，美國FISHER），實驗用水均為 GB/T 6682-2008 規定的一級水。

2 實驗方法

2.1 標準溶液的制備

（1）標準儲備液的制備：精密稱取 2.41 mg 阿力甜標準品，加水溶解并稀釋至 5.00 mL。濃度：0.472 8 mg/mL。

（2）標準工作曲線的制備：取上述溶液各0.1 mL，0.2 mL，0.3 mL，0.5 mL，1.0 mL分別置于10 mL量瓶，用水稀釋至刻度，搖勻，即為標準使用液。

2.2 樣品前處理與測定

蜜餞首先需要去掉果核。用食品加工機按試樣與水的質量比為 1∶4 進行勻漿，稱取約 5 g（精確到0.001 g）勻漿試樣于25 mL 的離心管中，加入 10 mL 70%的甲醇水溶液，搖勻，超聲 10 min，4 000 r/min離心5 min，上清液轉入25 mL容量瓶，再加8 mL 50%的甲醇水溶液重復操作一次，上清液轉同一個 25 mL 容量瓶，最后用 50%的甲醇水溶液定容，經0.45 μm有機系濾膜過濾后用于色譜分析。

3 色譜條件

色譜柱：Waters SunFire C18 250 mm×6.4 mm，5 μm，檢測波長：200 nm 柱溫：40 ℃，流速：1 mL/min，進樣量：10 μL，流動相：V甲醇∶V水＝（40∶60）。

4 數學模型的建立

試樣中阿斯巴甜或阿力甜含量的計算：

式中：X——試樣中阿斯巴甜或阿力甜的含量，g/kg；

ρ——由標準曲線計算出進樣液中阿斯巴甜或阿力甜的濃度，μg/mL；

V——試樣的最后定容體積，mL；

m——試樣質量，g；

1 000——由μg/g換算成g/kg的換算因子。

標準物質制備^[2]

一種阿力甜標準物質制備方法，包括以下各步驟：

(1)阿力甜溶液的制備：制備阿力甜標準物質的原料為工業級阿力甜，將阿力甜原 料溶于水并采用超聲溶解，然后經0.22μm濾膜過濾，得阿力甜溶液；

(2)液相色譜制備：將阿力甜溶液注入制備色譜分離純餾分，其色譜條件為色譜柱 為PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm,5μm)；流動相：40％(v/v)甲醇水溶液；流速：10mL/min； 柱溫：30℃；運行時間：15min；檢測波長：210nm，進樣量0.2mL，收集7.5-9min之內的餾分；

(3)餾分收集：餾分接收于預先氮氣填充的外壁包裹錫箔紙的棕色瓶中,然后加入 少量鹽酸中和至pH7；

(4)干燥：餾分置于旋轉蒸發儀采用減壓蒸餾的方法于55℃-75℃下，然后置于凍 干機-50℃中凍干24小時，凍干后的阿力甜固體碾磨粉碎后，再次凍干24小時已盡量去除游 離水，得阿力甜標準物質；經測定，該標準物質純度為99.4％。

(5)保存：在相對獨立和潔凈手套箱內對制備的純阿力甜固體采用2mL棕色樣品瓶 進行分裝，用帶有聚四氟乙烯內襯的黑色瓶蓋加封，并采用塑料袋獨立真空塑封。

主要參考資料

[1]包秘,唐昭領.高效液相色譜法測定蜜餞中阿力甜含量的不確定度分析[J].食品與發酵科技,2019,55(06):109-114.

[2] [中國發明,中國發明授權] CN201610174004.0 一種阿力甜標準物質制備方法