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以石蠟油(培養油)覆蓋培養液用于人類受精卵和胚胎的體外培養已經行之有年, 該項技術可有效避免在體外培養過程中培養液的蒸發損失,且覆蓋的石蠟油使得培養液和外部環境相互隔離, 有效避免溫度和pH值等在輔助生殖技術操作時產生波動, 保持培養液內環境相對穩定和防止污染。
然而移植前胚胎對其發育環境極為敏感,因此與培養液直接接觸的石蠟油也會對胚胎發育產生影響(石蠟油的水溶性成分可擴散到培養液中),國內研究人員為此開展了動物試驗,選取了三家廠商的四種石蠟油、觀察其對水牛孤雌胚胎體外培育的影響,結果顯示四種石蠟油對胚胎體外培育存在不同程度的影響,其中C公司石蠟油(過濾)對胚胎培育的效果最佳。
該試驗結果與早年海外的研究結果相類似,當時國外的研究人員比較了未經洗滌和經洗滌后的兩種石蠟油對微滴培養系統中鼠胚發育的影響,結果也顯示經洗滌后的石蠟油組的鼠胚發育更優。
進一步分析天然石蠟油所含成分,我們發現其中含有胚胎毒性物質,這些物質具有親水特性、易于擴散進入培養液中,而石蠟油的密度、黏性也會影響胚胎毒性物質擴散進入培養液中的速率和量,最后由于胚胎體外培養往往采用微滴模式、培養液的用量較少而石蠟油覆蓋后的接觸面積相對較大、使得石蠟油中的胚胎毒性物質更易于擴散進入培養液。
因此須對石蠟油進行洗滌和過濾,去除其中的有害成分,才能安全地使用于人類輔助生殖技術中,其品質需經過鼠胚試驗和人精子存活試驗的驗證。
人精子存活試驗。該試驗采用優化處理后活力保持在90%以上的人類精子,根據待測石蠟油的功能和特性,在相應培養環節使用待測石蠟油后,經37度培養24 小時后與對照石蠟油組比較,觀察待測組的精子活力是否顯著下降,從而評價待測石蠟油的品質和潛在毒性。
精子計數板、恒溫臺、光學顯微鏡、計數器、計時器、溫度計、水平式離心機、超凈工作臺、二氧化碳培養箱等。
重要評價指標
01. 精子活力,以前向運動精子所占全部精子的百分率表示(前向運動是指精子主動地呈線性或沿一大圓周運動,不考慮速度);
02. 精子活力系數,經過一定培養時間后的精子活力與培養開始時精子活力的比值,反映精子活力的變化情況;
03. 相對精子活力系數,相同培養時間,試驗組精子活力系數與對照組精子活力系數的比值,反映試驗組對精子活力的影響程度。