78214-33-2/人參皂苷Rh2的生物活性及其在體內濃度分析

概述

人參皂苷Rh2是從人參中提煉出來的抗癌活性植物成分，目前已被已被越來越多的腫瘤患者所認可，改善病人生活質量、延長生命具有很好的效果，故享有了“護命素”的美譽。護命素具體表現為輔助治療各類癌癥，化學名為原人參二醇-3-氧-B-D-吡喃葡萄糖苷，即人參皂苷Rh2。

生物活性^【1】

1．抗腫瘤作用

人參皂苷Rh2能顯著抑制人肝癌細胞SMMC-7721增殖，并存在時間依賴性和濃度依賴性。10ug／mL人參皂苷Rh2作用6天的抑制率達50％；而20ug／mL人參皂苷Rh2作用4天抑制率也近50％，肝癌細胞形態及亞細胞結構向正常肝細胞方向逆轉。進一步研究表明，人參皂苷Rh2能使SMMC-7721細胞血清甲胎蛋白合成明顯下降，分泌量從6．60％±0．30％下降到2．35％±0．06％，，γ-CT及耐熱型白蛋白(AIb)活性顯著降低，堿性磷酸酶活性及Alb分泌量顯著升高。用人參皂苷Rh2處理人肝癌SK—HEP-1細胞會使其發生明顯凋亡，在凋亡過程中c-Jun末端蛋白酶的活性隨之顯著上升，同時有Bcl一2敏感的caspase一3蛋白激酶活化。同時，人參皂苷Rh2對人肝癌細胞Bel一7404的增殖和凋亡也有一定影響。

人參皂苷Rh2可通過誘導p21蛋白質表達、降低cyclin D蛋白質水平、降低pRb磷酸化和抑制E2F釋放等機制來抑制人乳腺癌細胞系MCF-7細胞的生長，且抑制作用呈量效關系，可使細胞分裂停止在G1期，但其作用是可逆的。人參皂苷Rh2在體外濃度為10～60umol／L能抑制多種人類卵巢癌細胞株的增殖，且呈劑量依賴，在IC50濃度左右可導致細胞凋亡。

研究人參皂苷Rhz對小鼠黑色素瘤B16細胞的抑制作用，結果發現在10mg／L濃度下對B16細胞有較強的分化誘導作用，主要表現為黑色素生成能力明顯增加；形態向正常上皮樣細胞分化；細胞呈網狀結構；黑色素顆粒增加；生長變緩慢。用濃度為10mg／L的人參皂苷Rh2處理黑色素合成的限速酶酪氨酸，4h后酪氨酸活性明顯升高，與黑色素生成能力成正比，說明人參皂苷Rh2可誘導小鼠黑色素瘤B16細胞向正常色素細胞分化。人參皂苷Rh2還可抑制人惡性黑色素瘤A375～S2細胞的生長，其凋亡的發生部分依賴于caspase一3和caspase-8的通路。

另外，人參皂苷Rh2對前列腺癌細胞株、肺腺癌耐藥細胞、食管癌細胞和人白血病細胞等癌細胞均具有一定的誘導凋亡能力。

2．抗過敏作用

人參皂苷Rhz能抑制免疫球蛋白E誘導RBL-2H3細胞釋放β一氨基已糖苷酶(IC50為0．1mmol／L)和小鼠被動皮膚過敏反應[25mg／kg腹膜內注射時抑制率為(88％+8．2％)]，作用強于色甘酸鈉。在不同的掃描測熱計上人參皂苷Rh2顯示膜穩定作用，對脂多糖刺激RAW 264.7細胞產生的一氧化氮和前列腺素E2具有抑制作用。

3．免疫調節作用

人參皂苷Rh2及其化學衍生物硫酸化人參皂苷Rh2低濃度時都能促進淋巴細胞增殖，高濃度時都能抑制淋巴細胞增殖，硫酸化人參皂苷Rh2顯著高于同濃度的人參皂苷Rh2；人參皂苷Rh2能顯著促進雞外周血自然殺傷細胞的殺傷活性。研究表明人參皂苷Rh2體外能抑制免疫活性，化學修飾后的硫酸化人參皂苷Rh2體外能促進免疫活性。

藥代動力學^【2】

1．吸收

在人腸Caco一2細胞單層模型，人參皂苷一Rh2及其苷元原人參二醇能量依賴性被吸收，且呈時間和濃度依賴性關系，低溫降低其吸收率。當pH=7．0時，人參皂苷一Rh2的吸收達最大；當pH=8．0時，原人參二醇的吸收達最大。動力學分析表明：人參皂苷一Rh2的吸收呈非飽和性，Kd=0．17nmol/h/mg蛋白，轉運的Kd=3．95 mmol/L, Vmax=4．78nmol/h/mg蛋白；原人參二醇的吸收亦呈非飽和性，Kd=0．78nmol/h/mg蛋白。P一糖蛋白與人參皂苷一Rh2的轉運有密切關系。其結果提示腸內細菌對人參皂苷一Rh2的生物轉化可能影響其生物利用度。按0．1mg/kg劑量靜脈或lmg/kg劑量灌胃給予犬人參皂苷一Rh2，其在雄性犬的生物利用度為17．6％，在雌性犬的生物利用度為24．8％。 ’

2．代謝

給犬按0．1mg/kg劑量靜脈注射或按lmg/kg劑量灌胃人參皂苷一在血漿中可檢測到其代謝產物原人參二醇。

分析方法

1．高效液相色譜一質譜聯用法分析人參皂苷一Rh2在人腸Caeo一2細胞中的濃度

儀器：日本島津高效液相色譜儀，10 Advp泵；日本島津LC—MS 2010型液相一質譜聯用系統，檢測模式為電噴霧離子化方式(ESI)。 。

色譜條件：ODS色譜柱(150 mm×2．1 mm I．D．，5um)，連有C18預處理柱；流動相為乙腈一500 mmol/L氯化銨水溶液，起始為68：32，4min；隨后為95：5。梯度流速為0．2mL/min。干燥氣流速為4．5 L/min；CDL電壓固定，CDL溫度為250℃。

2．高效液相色譜一質譜聯用法分析人參皂苷一Rll2在犬血漿中的濃度

儀器和色譜條件同上法。

分析樣品的處理：取犬血漿用固相萃取柱處理，然后進行高效液相色譜一質譜聯用分析。

系統適用性試驗：人參皂苷一Rh2在犬血漿中的檢測范圍為2．0―1250．0ng/ml。日內和日間RSD皆小于10％，回收率大于80％。

參考文獻

[1] 劉斌著,中藥成分體內代謝與分析,中國中醫藥出版社,2011.08,第251頁

[2] 楊秀偉編著,中藥成分的吸收、分布、代謝、排泄、毒性及藥效 上冊,中國醫藥科技出版社,2006年8月,第1044頁