77-52-1/熊果酸對酒精性肝損傷大鼠腸道菌群的影響

酒精性肝損傷又稱酒精性肝病，是指長期大量飲酒所致的肝損傷，也是導致肝癌甚至急性肝衰竭最常見的誘因之一。熊果酸（UA）是一種弱酸性五環(huán)三萜類化合物，是多種植物的主要功能成分。目前研究已發(fā)現UA不僅具有抗炎、抑菌、等多種生物學效應，而且具有活性強、安全性高、毒性低（口服半數致死量為8330 mg/kg）等特性。

來自包頭醫(yī)學院營養(yǎng)與食品健康研究所的馬浩然、賈海蓮和包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院骨外科的張文龍等人以腸道菌群為著眼點，探討UA對酒精性肝損傷的保護機制。調節(jié)腸道菌群可以防止革蘭氏陰性菌的過量繁殖，進而避免內毒素水平過高對肝臟進行的“二次傷害”。本研究應用基因間重復共有序列（ERIC）-聚合酶鏈式反應（PCR）和PCR-變性梯度凝膠電泳（DGGE）指紋圖譜分析以及實時熒光PCR技術等方法，探討UA對酒精性肝損傷大鼠腸道菌群的影響，以期為后續(xù)UA對酒精性肝損傷的保護作用機制研究提供可參考的依據，同時也為酒精性肝損傷的防治提供新思路。

1.UA干預對酒精暴露大鼠肝臟組織病理學改變的影響

正常對照組大鼠肝小葉結構清晰，肝板排列整齊，肝細胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列；酒精模型組大鼠肝小葉結構模糊，肝細胞大片性壞死，胞質中可見大小不等、數量不一的圓形脂肪空泡，壞死區(qū)可見炎性細胞浸潤。而UA干預組肝小葉結構雖有不同程度破壞，但與酒精模型組相比較，肝索排列逐漸恢復整齊。

2.UA干預對酒精誘導肝損傷大鼠血清轉氨酶活力的影響

酒精模型組血清轉氨酶水平明顯高于正常對照組（P＜0.05），而UA干預組較酒精模型組ALT和AST活力均顯著降低（P＜0.05）。

3.UA對酒精性肝損傷大鼠血漿中D-LA濃度和內毒素水平的影響

大鼠給予50%酒精連續(xù)灌胃8周后，酒精模型組大鼠血漿D-LA濃度和內毒素水平顯著高于正常對照組（P＜0.05），分別為正常對照組的1.6、1.5倍；而UA干預后可明顯抑制酒精所致的血漿D-LA濃度和內毒素水平的升高（P＜0.05）。

4.大鼠腸道菌群ERIC-PCR指紋圖譜分析

酒精模型組大鼠腸道菌群明顯區(qū)別于空白對照組大鼠，在1000 bp左右有清晰明亮的條帶1，而UA干預組該條帶則較暗，接近正常水平；約在250 bp處空白組較酒精模型組有較亮的條帶2，UA干預組該條帶亮度介于二者之間。

5.大鼠糞便總DNA PCR-DGGE指紋圖譜分析

對各組大鼠糞便微生物總DNA16S rDNA V3可變區(qū)進行PCR擴增及1%的瓊脂糖凝膠電泳， 產物長度為220 bp。將擴增產物進行DGGE得到指紋圖譜， 進行UPGMA聚類分析，可見酒精模型組與其他兩組相似系數僅為0.21，UA干預組與正常對照組相似系數為0.46。酒精模型組大鼠腸道菌群多樣性明顯下降且與正常組的相似性較低，而UA干預組大鼠腸道菌群結構與正常組大鼠更相似。

6.糞便中特定菌株的定量分析

與正常對照組比較，酒精模型組大鼠糞便中大腸桿菌和糞腸球菌數量均明顯增多（P＜0.05）；而UA干預組大腸桿菌和糞腸球菌數量較酒精模型組顯著減少（P＜0.05），且與正常對照組大鼠間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。此外，酒精模型組大鼠糞便中長雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌數量與正常對照組相比均顯著降低（P＜0.05），而UA干預后可以明顯抑制這種變化，使兩種腸道菌群更趨近于正常對照組。

結論

蘇木精-伊紅染色病理學觀察顯示，酒精模型組大鼠肝小葉結構模糊，脂肪變性及炎性浸潤增多；與酒精模型組相比，UA干預組肝組織損傷程度明顯得到改善，且血清轉氨酶活力明顯降低（P＜0.05）。此外，UA的補充顯著抑制了酒精引起的血漿D-乳酸濃度及內毒素水平升高（P＜0.05）。ERIC-PCR和PCR-DGGE結果顯示，UA干預改善了酒精所致腸道菌群結構的紊亂，使其朝著正常組大鼠腸道菌群結構方向趨近。實時熒光定量PCR結果顯示，UA干預組大鼠腸道內長雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌含量明顯高于酒精模型組（P＜0.05），大腸桿菌和糞腸球菌含量較酒精模型組顯著減少（P＜0.05），且均接近于正常對照組。因此，適量地補充UA能夠有效改善酒精引起的大鼠肝臟損傷，其作用機制可能與UA調節(jié)酒精引起的腸道菌群結構和數量的改變、改善腸道微生態(tài)有關。

來源:《食品科學》2018年39卷11期146-151頁

作者：馬浩然、賈海蓮、張文龍、王晶、張男男、李可欣、邰大鵬、戈娜。