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以0.1%磷酸(pH2.5)為流動相A,以乙腈為流動相B,進行線性梯度洗脫。主峰與未知雜質的分離情況見下圖(紅框),分不開。
0.1%磷酸換為0.1%三氟乙酸,其它的色譜條件不變。主峰與未知雜質有分離跡象,見下圖(紅框)。
增加三氟乙酸的濃度(0.1%→0.4%),以及調整流動相A的pH值(2.5→4.0),主峰與未知雜質的分離滿足要求,見下圖
基線波動較大,由A液相換為W液相,再提高三氟乙酸的濃度為0.5%,主峰與未知雜質達基線分離,見下圖(雜質譜與上圖不同,是使用調整后合成工藝的原料藥,原料純度較高,并加入已知雜質)
分析:由磷酸溶液換為三氟乙酸溶液,可以改善主峰與未知雜質的分離度。是因為在溶液中主峰為陽離子,三氟乙酸為類似離子對試劑,通過離子的相互作用達到分離目的。