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672-15-1/L-高絲氨酸的制備方法

背景及概述[1]

(S)-2-氨基-4-羥基丁酸又叫L-高絲氨酸,是一種天然存在的非蛋白氨基酸。(S)-2-氨基-4-羥基丁酸及其衍生物是重要的生理活性物質的結構前體和合成砌塊,廣泛應用于各種活性物質的合成,日益受到科研工作者的重視。

L-高絲氨酸的制備方法

制備[1]

報道一、

L-高絲氨酸的制備方法

S1:在3升的三口燒瓶中,加入1500克水,然后加入298克L-蛋氨酸,充分攪拌,然后加入260克濃鹽酸,攪拌至清,然后在25℃滴加441克的硫酸二甲酯,室溫攪拌兩天,點板監控原料消失,得到L-蛋氨酸锍鹽反應液;

S2:將S1得到的L-蛋氨酸锍鹽反應液,升溫至回流狀態反應,然后緩慢滴加飽和碳酸氫鉀溶液(100克碳酸氫鉀溶于500克水),滴加過程控制pH在3-6,滴畢后繼續回流反應6小時,點板監控原料基本消失;

S3:將反應液降至室溫,然后薄膜濃縮出去大部分水,濃縮液預冷至5-10℃,用陽離子交換樹脂除鹽,洗脫劑為5%的稀氨水,洗脫液濃縮除去大部分水,得到比較粘稠的液體,降溫至10℃左右,加入3倍體積的丙酮打漿處理,過濾,干燥后得到(S)-2-氨基-4-羥基丁酸固體202克,收率85%。

報道二、

步驟1 L-天門冬氨酸甲酯的制備

將133.1g L-天門冬氨酸(1.0mol),1000ml無水甲醇加入2000ml三口瓶中,在5℃以下通入73g HCl。通入完畢后,緩慢升溫至回流反應2小時,減壓蒸出有機溶劑,得白色結晶L-天門冬氨酸甲酯鹽酸鹽165.2g,純度98.5%,收率90.0%(以L-天門冬氨酸計)。

步驟2 L-天門冬氨酸甲酯還原制備(S)-2-氨基-4-羥基丁酸

取以上73.5g L-天門冬氨酸甲酯鹽酸鹽(0.4mol),1100g無水甲醇加入2000mL三頸瓶中混合均勻,并用三乙胺調至pH為5,然后緩慢加入31g(0.8mol)NaBH4,加料溫度控制在0-5℃,控制還原劑的加入速度以免反應過于激烈或局部反應過于激烈。約1-2小時加完,加畢,加熱回流反應2-3小時,冷卻至室溫,于室溫以濃鹽酸調pH值為3,攪拌至無氣泡產生為止。過濾,濾餅用溶劑洗滌。濾液及洗液通過電滲析脫鹽,脫鹽后反應液減壓蒸至膠體,加入500mL 95%酒精,攪拌析出結晶,過濾,烘干得白色粉末狀結晶38.08g,熔點200-203℃,[α]D20=-8.3°(C=8,H2O)收率為80.0%。

檢測方法[3]

CN202010059578.X報道了一種同時檢測發酵液中L-高絲氨酸和游離氨基酸的HPLC方法,所述方法是先對發酵液樣品進行預處理,接著采用DEEMM衍生化試劑對發酵液樣品進行衍生化處理之后,再通過高效液相色譜和通用型C18色譜柱對發酵液中的L-高絲氨酸和其他游離氨基酸進行分離和測定;

所述預處理方法為:取發酵液樣品于離心管中,10000~12000r/min離心2~3min,收集上清液,用于下一步衍生化;

所述衍生化處理方法為:將上清液稀釋5~10倍取稀釋液,加入硼酸鹽緩沖液和0.5%的DEEMM甲醇溶液,溫度60~70℃下衍生化1~2h后,用0.22μm有機濾膜過濾,所得濾液進行下一步分離和測定;每200μL稀釋液加入350μL的硼酸鹽緩沖液和150μL的0.5%DEEMM甲醇溶液。

優選的,所述高效液相色譜檢測條件為:

檢測儀器:AgilentTechnologies1260InfinityⅡ高效液相色譜系統;

色譜柱:J&KScientificHPLCC-18Column(4.6×250mm,5μm);

流動相:流動相A為色譜級甲醇;流動相B為25mmol/L乙酸銨溶液,A:B=40%:60%,流速0.6mL/min;

柱溫:25℃;

檢測波長:250nm。

所述硼酸緩沖液按如下方法配制:稱取6.183g硼酸,加入70mL超純水溶解,用1mol/L的NaOH溶液調pH至9.0,加超純水定容至100mL。

所述DEEMM甲醇溶液按如下方法配制:吸取0.5mLDEEMM于100mL容量瓶中,用色譜級甲醇定容至100mL。

以上為定性檢測,也可為定量檢測,具體方法如下:先配制梯度濃度目標物質(L-高絲氨酸或游離氨基酸)標準品,按照前述相應方法進行預處理、衍生化和高效液相色譜檢測后,以色譜峰峰面積為橫坐標、標準品濃度為縱坐標繪制標準曲線,測得待測樣品中目標物質色譜峰面積后,對照標準曲線獲得待測樣品中目標物質的濃度值。通常L-高絲氨酸為定量檢測,游離氨基酸為定性檢測,根據需要,游離氨基酸也可按前述方法進行定量檢測。

本發明的有益效果主要體現在:本發明的方法使用的配置是高效液相色譜系統的標準液相配置,除了適用于氨基酸分析之外,還可用于其他物質的分析工作,普適性更強,具有檢測靈敏度高、樣品處理簡單、分析時間短、分析結果穩定、重復性好等優點,適用于常規實驗室。

參考文獻

[1] [中國發明] CN201910683388.2 一種L-高絲氨酸的制備方法

[2] [中國發明,中國發明授權] CN200710096668.0 一種制備L-高絲氨酸的新工藝

[3] [中國發明] CN202010059578.X 同時檢測發酵液中L-高絲氨酸和游離氨基酸的HPLC方法