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光甘草定是光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)中的主要黃酮類成分之一，現(xiàn)代藥理研究表明，光甘草定具有調(diào)節(jié)免疫、降血脂、降血糖、類雌激素、抗菌、抗氧化、抗炎等作用。
光甘草定在細(xì)胞色素 P450/NADPH氧化系統(tǒng)中顯示出很強(qiáng)的抗自由基氧化作用，能明顯抑制體內(nèi)新陳代謝過程中所產(chǎn)生的自由基，以免受對氧化敏感的生物大分子(低密度脂蛋白LDL,DNA)和細(xì)胞壁等被自由基氧化損傷，從而可以防治與自由基氧化有關(guān)的某些病理變化，如動脈粥樣硬化，細(xì)胞衰老等。意大利研究還證實光甘草定有抑制食欲的作用，它能減少脂肪卻又不減輕體重。光甘草定在心血管疾病的預(yù)防上具有良好的發(fā)展前景，在美容界，有著“美白黃金”的稱號，足以說明光甘草定在醫(yī)藥、食品和美容領(lǐng)域的重要性。
光甘草定的在光果甘草中的含量較少，僅有0.1％～0.3％，因此，需要一種從光果甘草中有效分離具有較高純度的光甘草定的制備方法。專利CN102250107A、CN103360404A、CN105777771A、 CN105294722A及CN104725394A公開了光甘草定的制備方法，但都使用了對環(huán)境不友好的有機(jī)溶劑，如乙酸乙酯等，易造成環(huán)境污染，不適合工業(yè)生產(chǎn)。專利CN107383039公開了的光甘草定的制備方法，雖然制備過程中不包括環(huán)境不友好的有機(jī)溶劑，但制備工藝繁瑣，需要經(jīng)過三個聚酰胺柱和一次硅膠柱，成本過高，不適合大規(guī)模生產(chǎn)。因此，亟需一種兼具工藝路線簡單、環(huán)境友好、成本低、適合工業(yè)化生產(chǎn)的高純度光甘草定的制備方法。
一種光甘草定的制備方法，包括以下步驟：
(1)取粉碎的光果甘草1kg，依次利用10重量份水、8重量份水和8重量份水在80℃下提取三次，每次60min；得到的提取液另做處理，收取得到的光果甘草渣。
(2)取步驟(1)得到的光果甘草渣，依次用10重量份95％v/v 乙醇、8重量份95％v/v乙醇和8重量份95％v/v乙醇在70℃下提取三次，每次2h，過濾，合并得醇提取液。
(3)取步驟(2)得到的醇提取液，減壓濃縮回收乙醇，得到 110g提取物A，加入55％v/v乙醇2L，進(jìn)行超聲溶解，過濾得到液體部分，減壓濃縮得到醇提取物。
(4)大孔吸附樹脂柱層析分離：將步驟(3)得到的醇提取物與 6kg的AB-8(140目)大孔吸附樹脂拌樣，裝柱，以250mL/min的速度進(jìn)行洗脫(洗脫條件如表1所示)，利用薄層色譜法(展開劑為石油醚：乙酸乙酯＝3：1)收集R為0.3～0.6的洗脫液，收集含有光甘草定的洗脫液B。
表1大孔吸附樹脂的洗脫條件
(5)聚酰胺柱層析分離：對洗脫液B進(jìn)行減壓濃縮，得到提取物C，與600g聚酰胺拌樣，裝柱，以200mL/min的速度進(jìn)行洗脫(洗脫條件如表2所示)，利用薄層色譜法(展開劑為石油醚：乙酸乙酯＝3：1)收集R為0.3～0.6的洗脫液，得到含有光甘草定的洗脫液。
表2聚酰胺柱層析的洗脫條件
(6)對分離得到含有光甘草定的洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，然后將濃縮得到的固體部分溶解在乙醇中，滴加水(加水量與乙醇的體積比為4：6)，使得光甘草定重結(jié)晶，得到1.1g純度為98.5％的光甘草定。
一種香草醛?硫酸比色法測定光甘草定含量的方法，該方法分為兩大步驟，第一步驟是顯色液吸光度值信息的采集過程，第二步驟是光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液濃度?平均吸光度值的線性回歸方程建立過程，該方法所需要時間比高效液相色譜法大大縮短，并且顯色液在室溫60min內(nèi)穩(wěn)定可靠，非常適合大量待測光甘草定含量的集中檢測。
為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種香草醛?硫酸比色法測定光甘草定含量的方法，該方法主要涉及到：光甘草定的標(biāo)準(zhǔn)品純度HPLC≥98%，無水甲醇，質(zhì)量百分比濃度是98%的硫酸，香草醛，恒溫水浴鍋，比色皿，紫外可見分光光度計；該方法通過B環(huán)具有間苯二酚結(jié)構(gòu)且C環(huán)C2、C3是單鍵的光甘草定與香草醛試劑發(fā)生反應(yīng)并在質(zhì)量百分比濃度是98%的硫酸酸性條件下使反應(yīng)液顯色，再利用紫外可見分光光度計測定顯色液在其最大吸收波長534nm下的吸光度值，從而完成顯色液吸光度值信息的采集過程：在所述酸性條件下，顯色液的顏色深淺與光甘草定的含量呈顯著線性正相關(guān)關(guān)系，符合朗伯?比爾定律，從而為光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液濃度?平均吸光度值的線性回歸方程建立奠定了基礎(chǔ)，所述線性回歸方程為以后待測樣品中光甘草定含量的測定提供了定量標(biāo)準(zhǔn)。
[1] CN201811008398.8 光甘草定的制備方法及由該制備方法得到的光甘草定、化妝品
[2] CN201110230297.7 香草醛-硫酸比色法測定光甘草定含量的方法