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牡丹根皮含有牡丹酚、芍藥甙、沒(méi)食子酸、揮發(fā)油0.15～0.4％植物淄醇、牡丹酚甙、沒(méi)食子酸葡萄糖、牡丹酚原甙、氧化芍藥甙等，因此牡丹不僅具有很高的觀(guān)賞藝術(shù)價(jià)值，且有很好的養(yǎng)生、美容、藥用價(jià)值。
牡丹酚經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血壓、能夠抑細(xì)胞內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生能使皮膚增白，并將皮膚中沉積的色素，還原退色，清淤化斑、清腫止痛、抗過(guò)敏、抗病毒，對(duì)色斑、肌肉痛、皮膚瘙癢、牛皮癬、帶狀皰疹；婦女痛經(jīng)、閉經(jīng)具有較好的治療和保健作用，促進(jìn)面部肌膚血液循環(huán)、活化衰老表皮細(xì)胞，消除皺紋、去斑、潤(rùn)膚、美容也有較好的功效。牡丹酚及多酚類(lèi)物質(zhì)有一定量的R·OH基，能夠形成有抗氧化作用的氧自由基以消除超氧陰離子和羥自由基等自由基的活性。從而保護(hù)組織免受氧化作用的損傷，以提高其免疫功能、抗癌、抗衰老，因此已被稱(chēng)作“第七大營(yíng)養(yǎng)素”。因氧損傷導(dǎo)致許多慢性疾病，如：心血管病癥、衰老的主要原因，多酚的抗氧化功能可以對(duì)這些慢性疾病起到預(yù)防的作用，對(duì)能產(chǎn)生過(guò)氧化作用而導(dǎo)致結(jié)構(gòu)和功能損傷的超氧化陰離子和羥自由基有明顯的消除作用。作為一種很強(qiáng)的抗氧化劑可以抑制DL膽固醇氧化。DL膽固醇即壞膽固醇，是血液中的“雜質(zhì)”可以引起冠心病和心肌梗塞死等。其物理性可用紫外分光光度計(jì)測(cè)定，在274nm波長(zhǎng)E(1％cm)為862紫外光區(qū)有強(qiáng)烈吸收，因此又有防曬的功效。
目前常用的從牡丹根皮中提取牡丹酚的方法有三種。一、醇提法以無(wú)水乙醇為溶劑，40℃溫度下回流提取，即可將牡丹酚提取出來(lái)。醇提法提取工藝簡(jiǎn)單，有效成分提取多，似應(yīng)為牡丹皮提取的最佳方法，但問(wèn)題在于牡丹酚熔點(diǎn)低、揮發(fā)性強(qiáng)，而醇提法提取過(guò)程中受熱溫度高、時(shí)間長(zhǎng),大大降低了牡丹酚的提取率。二、蒸餾－煎煮法蒸餾-煎煮法是指先蒸餾提取揮發(fā)性成分，藥渣再加水提取的方法，適用于含揮發(fā)性成分藥材的提取。牡丹酚隨蒸氣餾出后，在冷藏狀態(tài)下大量析出，濾過(guò)干燥即可用于成型，保存方便且轉(zhuǎn)移率較高，但其提取率遠(yuǎn)低于醇提法。三、CO2超臨界流體萃取法：應(yīng)用超臨界萃取法是當(dāng)前中草藥有效成分提取一個(gè)發(fā)展方向，具有提取溫度低、時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，但是提取量少。目前還未見(jiàn)有關(guān)于利用乙醇以及CO2超臨界流體萃取制備牡丹酚的方法。
CN201610767084.0報(bào)道了一種牡丹酚的提取方法，具體步驟如下：
（1）取牡丹根皮粉碎，過(guò)40目篩，以3-6重量倍乙醇為夾帶劑，用CO2超臨界提取，具體參數(shù)為：萃取釜溫度65-72℃，萃取壓力11-14MPa，流速10-12L/h，提取時(shí)間5-6小時(shí)；第一分離釜：溫度52-56℃，分離壓力7MPa；第二分離釜：溫度40-43℃，分離壓力3-4MPa；制得牡丹根皮CO2超臨界萃取物A；
（2）將步驟（1）中的牡丹根皮CO2超臨界萃取物A通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附，用濃度為10-20％的乙醇預(yù)洗，再以流速10-12L/h、濃度為50-80％的乙醇洗脫，收集的洗脫液為藥液B；
（3）將藥液B在60-65℃范圍內(nèi)濃縮得稠膏C；
（4）取稠膏C以純化水提取5-6次，提取液冷卻至0-10℃，靜置24-30h，過(guò)濾，并在25-30℃范圍內(nèi)，濃縮成無(wú)醇稠膏D，即得牡丹酚。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟（1）中CO2超臨界提取，具體參數(shù)為：萃取釜溫度68℃，萃取壓力12MPa，流速11L/h，提取時(shí)間6小時(shí)；第一分離釜：溫度54℃，分離壓力7MPa；第二分離釜：溫度42℃，分離壓力3.5MPa；制得牡丹根皮CO2超臨界萃取物A。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提高了牡丹酚的提取率，縮短了提取時(shí)間，降低了提取溫度，本發(fā)明提取條件溫和，所用試劑均無(wú)毒，全部純天然萃取，無(wú)添加，無(wú)著色，提取的牡丹酚可用于食用等用途，口感清純，風(fēng)味獨(dú)特，保存了天然活性成分，以利于人體吸收。
圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
牡丹酚與可接受的輔料，制成散劑，添加至飼料中，混勻，按日常飼料量喂食雞；或?qū)⒛档し又瞥赡档し铀苄苑蹌苡谒?，按日常飲水量喂食雞。通過(guò)動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)牡丹酚的抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)可達(dá)到180以上，具有較好的抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)作用。
一種牡丹酚的層析分離純化方法，其包括以下步驟：
(a)細(xì)胞破碎：冷凍保存的牡丹丹皮破碎前一天取出，在室溫下解凍→稱(chēng)取牡丹丹皮提取物懸液，記錄體積和質(zhì)量→加入等體積50毫摩爾PBS(pH6.8)→樣品裝在燒杯中，超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行細(xì)胞破碎，每個(gè)破碎周期間隙時(shí)間1s，超聲時(shí)間2s；總時(shí)間30min；在冰浴下進(jìn)行。每隔5min用玻棒沿?zé)谳p輕攪動(dòng)，使破碎更完全，破碎后的樣品記為樣品1。
(b)鹽析：將步驟(a)取得的樣品1→4℃冷凍離心(8000rpm，30min)，去沉淀→加入適量固體(NH4)2SO4，使達(dá)28％飽和→4℃靜置→4℃冷凍離心(8000rpm，30min)，去沉淀→上清液中加入適量(NH4)2SO4，使達(dá)50％飽和→4℃靜置→4℃冷凍離心(8000rpm，30min)，去上清。所得樣品記為樣品2。固體(NH4)2SO4用量參考硫酸銨沉淀試劑表。(NH4)2SO4用前先碾勻，加(NH4)2SO4的過(guò)程要緩慢，并一邊輕輕攪拌，加完(NH4)2SO4后繼續(xù)攪拌幾分鐘。
(c)透析：收集步驟(b)鹽析所得的沉淀，裝入透析袋，排除氣泡，用透析夾封住袋口一將裝有樣品的透析袋置于合適容器中加入lO毫摩爾PBS緩沖液，開(kāi)始透析，透析數(shù)小時(shí)。所得的樣品記為粗提液。
(d)選擇柱層析：牡丹提取物牡丹酚分離純化過(guò)程中，不同的的層析柱在洗脫條件等方面不盡相同。在柱型及洗脫條件的選擇上參考各種填料的性質(zhì)并進(jìn)行改進(jìn)。
(e)裝柱：選取合適規(guī)格層析柱→豎直固定柱子→調(diào)整流出管高度→往預(yù)加水/緩沖液的柱子中，小心裝入處理好的填料(HA、DEAE、DEAE-SepharoseFastFlow和SephadexG-X系列)→平衡。裝柱過(guò)程應(yīng)避免氣泡產(chǎn)生，用藍(lán)色葡聚糖2000過(guò)柱，檢驗(yàn)裝柱效果。
(f)上樣走柱：上樣前，用攪拌器小幅度攪動(dòng)，使柱頂端部分填料重懸→靜置→待液面與柱面相隔約1mm時(shí)，沿層析柱內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)加入樣液，注意不要破壞柱面。
(g)洗脫干燥獲得成品：樣品完全進(jìn)入柱體后，加入適量洗脫緩沖液，調(diào)整好各相關(guān)儀器(包括梯度洗脫器、攪拌器、恒流泵、核酸蛋白檢測(cè)儀及記錄儀和自動(dòng)部分集器等)，開(kāi)始洗脫，洗脫結(jié)束干燥后獲得牡丹酚成品。
[1][中國(guó)發(fā)明]CN201610767084.0一種牡丹酚的提取方法
[2]CN201310471618.1牡丹酚在制備抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)藥物中的應(yīng)用
[3][中國(guó)發(fā)明]CN201410391884.8一種牡丹酚的層析分離純化方法