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三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP鹽酸鹽)是一種新型的巰基化DNA的還原劑和去保護劑。巰基化DNA末端硫原子在溶液中趨向于形成二聚體,特別是在存在氧氣的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯反應實驗(如DNA在生物感應器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP鹽酸鹽),反應一段時間后除去,就可以降低DNA的二聚化。三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP鹽酸鹽)也常常被用于蛋白質中二硫鍵的還原,可用于阻止蛋白質中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質分子內或分子間二硫鍵。與巰基化DNA 的傳統還原劑和去保護劑巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)相比,三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽 (TCEP鹽酸鹽)的穩定性更高,不易被空氣氧化,沒有任何刺激性氣味。
在機械攪拌條件下,向250ml的反應瓶中加入質量分數為80%的四羥甲基氯化磷水溶液(71.2g,0.30mol)以及乙醇(75ml),冰水冷卻并用氮氣保護,加入氫氧化鉀(16.8g, 0.30mol)溶于23ml冰水的溶液,溫度略有上升;然后滴加丙烯酸乙酯(90g,0.9mol),控制溫 度35-40℃,有大量固體生成,滴完保溫攪拌4小時。向反應液中倒入300ml冰水,攪拌后抽 濾,用冰水洗滌濾餅,抽濾晾干得白色固體88g(即,化合物三甲基3,3',3”-膦三基三丙酸 酯),收率86.6%,以供下一步反應使用。所得產物的核磁數據如下:1HNMR(CDCl3,400MHz):δ=1.27(t,9H),1.75(t,6H),2.45(dt,6H),4.15(q,6H)。
在機械攪拌條件下,向250ml反應瓶中加入上述反應所制備的三甲基3,3',3”-膦 三基三丙酸酯(88g,0.26mol)以及摩爾濃度為12mol/L的濃鹽酸(120ml,1.44mol),攪拌升溫至80℃,固體逐漸溶解,繼續保溫反應3小時,攪拌并用冰水冷卻,析出白色固體,抽濾,濾餅用蒸餾水重結晶,得白色晶體,即三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽,烘干,稱重57.2g,收率 76.9%。mp174-176℃。核磁數據如下:1HNMR(D2O,400MHz):δ=2.57(dt,6H),2.88(dt,6H)。
CN201910350963.7公開了一種蛋白質組樣本處理試劑盒、處理方法及應用。該試劑盒包括:三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽、2,2-二氯乙酰胺、脫氧膽酸鈉以及緩沖液。應用本發明的技術方案,蛋白質組樣本處理前,將本發明試劑盒中的三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽、2,2-二氯乙酰胺、脫氧膽酸鈉以及緩沖液配成處理液,其中,通過脫氧膽酸鈉來對細胞/組織樣本進行裂解和細胞內全蛋白變性,三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽作為還原劑,2,2-二氯乙酰胺作為烷基化試劑,蛋白質組樣本在處理液中數分鐘即可完成裂解與還原烷基化。也就是說,在本發明中裂解與還原、烷基化一步完成,這樣使得蛋白質組樣本處理流程簡單,而且節約了時間。
CN201811195644.5報道了一種低共熔溶劑整體柱酶反應器及其制備方法。制備步驟:將自由基引發劑偶氮二異丁腈加入低共熔溶劑/離子液體中,超聲分散后,加入功能單體甲基丙烯酸、共聚單體甲基丙烯酸丁酯、交聯劑二甲基丙烯酸乙二醇酯,超聲溶解后注入毛細管中,熱引發合成整體柱,用三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽(TCEP-HCl)試劑使胰蛋白酶中的雙硫鍵還原為巰基,加入過硫酸銨和N,N’-亞甲基雙丙烯酰胺制備酶衍生液,在室溫下與整體柱反應固定到整體柱表面,進行酶解蛋白。整體柱結構穩定,對酶活性影響較低,可作為重復利用的新型酶反應器酶解蛋白溶液。本發明采用原位聚合法在毛細管內直接聚合,合成方法簡便易行,操作簡單,聚合時間較短,成本低廉,具有廣泛的應用前景。
[1] [中國發明,中國發明授權] CN201310173962.2 三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽的制備方法【公開】/三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽的制備方法【授權】
[2] CN201910350963.7蛋白質組樣本處理試劑盒、處理方法及應用
[3] CN201811195644.5低共熔溶劑整體柱酶反應器及其制備方法