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474-58-8 / 西托糖苷的應用

背景及概述[1][2][3]

胡蘿卜苷是傳統常用中藥望江南中的一種活性單體。已有研究表明,胡蘿卜苷能夠抑制肝癌細胞的增殖、遷移。胡蘿卜苷還可促進肺癌A549 細胞發生線粒體依賴的細胞凋亡,誘導細胞周期阻滯在G2 /M 期,但具體機制尚不清楚。我們研究結果發現,胡蘿卜苷處理肝癌HepG2 細胞48 h 后對細胞的增殖有明顯的抑制作用,且隨著胡蘿卜苷濃度增加,抑制效應越顯著。

胡蘿卜苷屬于天然甾類化合物,研究制備胡蘿卜苷,對于開發天然活性甾體化合物藥物,具有重要作用廣闊的醫藥前景。自然界中多種植物含有胡蘿卜苷成分,含量較低,一般是在植物成分系統分離時得到,大多采用乙醇或甲醇提取,石油醚、乙醚或醋酸乙酯脫脂,再用水分散,正丁醇萃取,硅膠柱層析分離,采用梯度洗脫,洗脫劑用不同比例氯仿 甲醇。洗脫劑有毒性,為混合溶媒,不易回收應用,制得的胡蘿卜苷樣品量很少,不適于大量制備。

結構

西托糖苷的應用

應用[1-2]

胡蘿卜苷是一種重要的藥用原料,研究表明胡蘿卜苷能保護人微血管內皮細胞抑制氧化損傷,經對氧化損傷細胞的修復作用比較后發現,胡蘿卜苷表現出了修復治療作用,但保護優于修復作用,即預防優于治療作用。胡蘿卜苷對成骨樣細胞UMR106的增殖具有顯著的促進作用,是對成骨樣細胞UMR106的增殖的活性成分。

有研究觀察胡蘿卜苷對人肝癌細胞株HepG2 增殖、凋亡的影響,并探討其機制。體外培養HepG2 細胞,取對數生長期細胞,分為胡蘿卜苷組和對照組。將HepG2 細胞按5 × 105 /mL 接種于96 孔板中,胡蘿卜苷組分別加入25、50、100、150、200 μg /mL 的胡蘿卜苷,對照組不加入藥物,繼續培養48 h 后采用CCK-8 法測算細胞增殖抑制率。

將HepG2 細胞按5 × 105 /mL 接種于6 孔板中,胡蘿卜苷組分別加入50、100 μg /mL 的胡蘿卜苷,對照組不加入藥物,繼續培養48 h 后采用流式細胞儀觀察細胞凋亡情況,采用Western blotting 法檢測細胞中的凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2 及Wnt /β-catenin 信號通路相關蛋白WNT3A、β-catenin。結果顯示,胡蘿卜苷各亞組細胞增殖抑制率均高于對照組,且胡蘿卜苷組中25、50、100、150、200 μg /mL 亞組細胞增殖抑制率依次增高。

胡蘿卜苷組50 μg /mL 亞組、100 μg /mL 亞組細胞凋亡率均高于對照組,且100 μg /mL 亞組細胞凋亡率高于50 μg /mL 亞組。對照組及胡蘿卜苷組的50 μg /mL 亞組、100 μg /mL 亞組細胞中Bax 蛋白相對表達量依次增高,Bcl-2、WNT3A、β-catenin 蛋白相對表達量依次降低。因此胡蘿卜苷可抑制HepG2 細胞增殖并促進其凋亡,其機制可能與抑制Wnt /β-catenin 信號通路、調節凋亡相關蛋白表達有關。

此外,有研究提供了一種以胡蘿卜苷為主要原料,再加入溶劑、增溶劑和乳化劑等輔料制成的殺螨水乳劑,其含量舉例如胡蘿卜苷10kg,大豆油20kg,乙醇5kg,吐溫 80為3.5kg,硅藻土6Kg,異丙醇2Kg,苯甲酸鈉0.1Kg,有機硅0.1Kg。

其制備如下:按照重量比取原料,將胡蘿卜苷用大豆油和乙醇溶解,加入硅藻土混合均勻,用膠體磨研磨30分鐘,加入30kg水、吐溫 80、異丙醇、苯甲酸鈉和有機硅后,繼續在膠體磨上研磨30分鐘,移至乳化釜中,加水至100kg,在6000轉./分鐘的轉速下攪拌25分鐘,即可獲得本發明胡蘿卜苷水乳劑,稀釋100 300倍后使用,采用噴霧方式防治朱砂葉螨。該殺螨劑是一種對人畜安全、環境友好型的和諧農藥,對生態環境長遠發展、人類的健康和病害的綜合治理都具有深遠的意義。

上述胡蘿卜苷植物殺螨劑與傳統的農藥相比,具有以下的特點和優點:1、胡蘿卜苷在自然界中大量存在,尤其是在植物中含量較高,其毒性低,易降解,并對生態環境安全;2、胡蘿卜苷提取方法較為簡單,可通過液相色譜分離法等工藝提取;3、胡蘿卜苷也可通過人工合成,其成本低,易用于工業化大規模生產;4、胡蘿卜苷由于其物理和化學特點,能溶于多種溶劑,易與其它殺螨成分混配制藥,可起到提高殺螨效果的作用;5、胡蘿卜苷植物殺螨劑水乳劑以大豆油為溶劑,無毒環保,能夠增加胡蘿卜苷在水中的溶解度,并兼有促進農藥滲透植物表皮的作用。

制備[3]

一種從柏子仁中提取柏子仁油及胡蘿卜苷的方法,采用以下步驟:取10Kg柏子仁,粉碎,用石油醚(40℃)提取2次,每次用4倍量,每次提取1 小時,過濾,合并石油醚液,回收石油醚至凈,得4.6Kg柏子仁油,精制后可食用。提取柏子油后的柏子仁揮盡石油醚,用乙醇提取2次,每次用8倍量,每次提取2 小時,濾過,合并濾液。回收乙醇至浸膏狀,得浸膏1.1Kg。

加入2.2Kg柱層析硅膠(100 200目)攪拌均勻,置干燥箱中,60℃干燥約5小時,放冷,得柱層硅膠拌和物。取8.8Kg柱層析硅膠(100 200目),用石油醚(70℃)濕法裝柱,將上述柱層硅膠拌和物加入層析柱中,用石油醚(70℃) 醋酸乙酯(1∶1)洗脫,洗脫至流出液近無色,改用醋酸乙酯洗脫,以薄層色譜檢測,洗脫至流出液不在檢出胡蘿卜苷為止,合并醋酸乙酯洗脫液,回收醋酸乙酯,得胡蘿卜苷粗分離物。

將胡蘿卜苷粗分離物用200倍乙醇加熱溶解,加入占乙醇重量2%活性炭,加熱至沸騰,保持微沸30分鐘,趁熱濾過,用少量乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液。將上述濾液濃縮至原體積的1/4時,室溫放置12小時,讓沉淀析出,濾過,得4.5g胡蘿卜苷精品,含量達98%,見液相色譜圖。濾液繼續濃縮1/2體積,放置,過濾,得1.2g胡蘿卜苷精品。

主要參考資料

[1] 胡蘿卜苷對人肝癌細胞株HepG2 增殖、凋亡的影響

[2] CN201110140348.7一種胡蘿卜苷植物殺螨劑及其用途

[3] CN201010004245.3一種從柏子仁中提取柏子仁油及胡蘿卜苷的方法