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茜素絡合指示劑(Alizarin complexone )為姜黃色粉末，微溶于水、乙醇和乙醚， 在 pH>5 時能溶于水，pH< 5 時為黃色，pH≥6 時為紅色，pH>11.5 時為藍色。其化學全稱是3-茜素甲基胺-N，N-二乙酸，又名茜素氨羧絡合劑，也叫氟試劑。它主要用作螯合滴定鋇、鈣、鎘、鈷、銅、銦、鉛、鍶、鋅等金屬的絡合指示劑，是測定氟的高靈敏度和特效性光度試劑。
茜素絡合指示劑的合成工藝路線一般是由茜素、甲醛和亞氨基二乙酸在堿性條件下，進行曼尼期(Mannich) 縮合反應，再利用茜素絡合指示劑在酸堿性 ( pH大于或小于5) 條件下，水中溶解度的差異而進行分離、精制。
1. 茜素絡合指示劑的合成
1.1 原料亞氨基二乙酸鈉的制備
在 1000 mL 燒杯中，加入 100 g 亞氨基二乙酸，攪拌下，慢慢加入62.4 g氫氧化鈉和140 mL純水配制成的溶液，攪拌均勻，靜置冷卻，自然結晶，離心得白色結晶。
1. 2 縮合反應
一個裝有攪拌機、溫度計 (100℃)、冷凝管、氮氣導入管的 1 000 mL 四口燒瓶中，加入乙醇 400g、N，N- 二甲基甲酰胺40g、亞氨基二乙酸鈉 (上述)32.5 g、茜素 10 g 及 2 mol/L氫氧化鈉溶液 77.5 mL，攪拌下，加熱使溫度升到70℃左右，加入第一份25g(甲醛6.5 g+乙醇18.5g) 混合液，保持溫度 77~79℃，反應 3 h 后，加入第二份甲醛、乙醇混合液(配比同前) 18g，繼續回流3 h，再加入第三份 18g甲醛、乙醇混合液，共回流 12 h后，放置，冷卻。次日，將析出的沉淀物濾出，得到紫紅色固體，再將其加入3倍的純水中，加熱至 50 ℃溶解后，加10%鹽酸至pH=1.8，析出橙黃色(帶褐色)固體，即為粗品茜素絡合指示劑。
1.3 精制
在粗品茜素絡合指示劑中，加入4倍量的純水，攪拌下，加入1 mol/L 氫氧化鈉溶液，調至 pH=5.5，加熱至50℃左右，10mim 后過濾，濾液用活性炭處理到游離茜素含量合格為止。然后，在濾液中加入10%鹽酸，酸化至 pH=1.8， 析出橙黃色沉淀，濾出沉淀，用澄清的 pH=1.8 的鹽酸洗滌，在45℃干燥得成品 10.5 g， 得率 66.5 %。熔點180 ℃(分解) 1HNMR(DMSO)， δ:3.40(s，4H); 3.97 (s，2H); 7.60 (s，1H); 7.80 ~7.95(m，2H); 8.10~8.25(m，2H); 12.53(br，4H)。
一、用于標記刺參個體
刺參體壁柔軟，缺乏鈣質骨骼，對異物有排異反應，故難以使用傳統標記方法對其進行標記。國內尚未見標記海參的相關方法。CN201010105394.9提供一種容易操作、便于識別、標記保持時間長，而且避免排異反應的標記刺參個體及檢測該標記的方法。包括以下步驟：
(1)取一定數量的健康刺參暫養在流水水槽中，禁食24-48小時，連續向水槽中充氣(空氣)；
(2)配制濃度為40-160mg/L的茜素絡合指示劑(英文名：Alizarin Complexone dihydrate，分子式：C19H15NO8)的染料溶液；
(3)將刺參放入所述茜素絡合指示劑的染料溶液中浸泡16-48小時，期間連續充氣(空氣)，停止喂食
檢測采用上述標記方法標記的刺參的方法，包括以下步驟：
(1)刮取小米粒大小刺參的體壁表皮或結締組織，鋪在載玻片上；
(2)向刺參體壁表皮或結締組織上滴加1-2滴10wt％NaClO水溶液，待體壁表皮或結締組織溶解后，滴加蒸餾水1-2滴進行稀釋，加蓋玻片；
(3)在熒光顯微鏡熒光激發波長510-560nm下，觀察用上述方法制成的載玻片。
本發明的有益效果是：
1、本發明的標記方法完全是在刺參正常生長狀態下進行，無需對刺參進行注射或麻醉，不損傷刺參活體，減少了標記的操作步驟，避免刺參活力降低，降低死亡率。2、本發明所使用的染料價格低廉易得，節省了標記所需費用。3、此外，采用本發明的標記方法，由于染料僅對刺參體壁內骨片染色標記，并未植入外來異物，避免刺參對異物的排異反應，從而延長了標記的保留時間。
二、用于標志石首科幼魚
CN201410145230.7提供一種標志石首科幼魚的方法，該方法操作簡單、標志 效果好、成本低、容易識別，而且對于魚類幼魚無毒、無損傷。石首科魚類有大黃魚、黃姑魚、日本黃姑魚、雙棘黃姑魚、淺色黃姑魚、美國紅魚等，養殖區域主要集中在東海沿岸。石首科魚類的耳石比較大，熒光 物質會在耳石上形成永久的標記，可以用于魚類標記流放。其步驟包括：（1）熒光染色母液的配置：將茜素絡合指示劑粉末溶于水，制成濃度為 0.5-1g/L的熒光染色母液，用KOH或者NaOH溶液作為pH調節劑，將熒光染色 母液的pH值調節至8-9；（2）標志：將步驟（1）中的熒光染色母液稀釋至濃度為90-110ppm的熒 光染色液，將石首科幼魚浸泡在該熒光染色液中22-24小時，浸泡的同時，向染色液中通入純氧。本發明的有益效果是：1、本標志石首科幼魚的方法操作簡單，幼魚的耳石染色后為粉紅色標志色，容易識別，無毒無損傷，標志色保持率高，保留時間長。2、本標志石首科幼魚的方法可進行大批量標志處理，節約了標志時間，而且使用過的熒光染色劑可以重復多次利用，降低了標志成本。3、若采用本標志方法染色效果不明顯，可進行二次染色，石首科幼體無應激反應。
[1]柯德宏.茜素絡合指示劑合成工藝的探索[J].上海化工，2007(12):15-17.
[2] CN201010105394.9 一種標記刺參個體及檢測該標記的方法
[3] CN201410145230.7 一種標志石首科幼魚的方法