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利巴韋林(Ribavirin)為鳥苷、次黃嘌呤核苷類似物，是一種廣譜抗病毒藥物，對多種DNA和RNA病毒均有較好抑制作用。具有作用位點多、不易產生耐藥性、療效高、毒性低，副作用小等特點，現已用于多種病毒的治療。在臨床上用于治療丙型肝炎病毒、呼吸道合孢病毒和拉沙熱病毒感染。
目前利巴韋林的工業化生產方法主要有微生物發酵法、酶法以及化學合成法。發酵法存在著生產周期長、容易污染雜菌、利巴韋林提取工藝復雜以及能耗高等缺點。化學合成法，反應條件苛刻，周期長，需要進行異構體的分離，成本居高不下，而且容易造成環境污染，所以，在工業化生產中受到一定的限制。酶法克服了發酵法和化學法的不足，同時生產成本較低，因而是較為有效的工業化生產方法。
其中，可以作為酶法合成利巴韋林的起始原料有鳥苷、肌苷、腺苷、胞苷或尿苷等。由于目前市場上鳥苷的生產成本較低，而且鳥苷作為反應底物時的分解產物為鳥嘌呤，它的溶解度極低(幾乎不溶于水)，使得整個反應平衡傾向于利巴韋林的合成方向，因而可以得到更高的底物轉化率。而未反應的底物鳥苷可以被離心后重新利用，反應副產物鳥嘌呤則可以用作藥物阿昔洛韋的原料，所以鳥苷經常作為反應底物，選擇PNPase作為催化劑。
酶或細胞作為催化劑由于易失活、難以反復使用、不易保藏，限制了工業化應用。全細胞固定化技術與游離酶和細胞催化相比具有很大優勢。細胞 固定化避免了的酶的提取過程，操作相對容易，并且具有更高的操作穩定性。細胞固定化的方法有很多種，適用于細胞固定化的方法主要有包埋法，吸附法，交聯法等，其中包埋法是最為常用的方法。由于細胞被固定化，減少了轉化液中由游離細胞裂解產生的蛋白，降低了提取的困難，減少了提取成本。
在現有技術的基礎上，研究一種高純度利巴韋林的制備方法具有非常重 要的生產實踐價值。
CN201610060219.X提供一種利巴韋林的制備方法，利用酶 催化法合成利巴韋林并對利巴韋林分離提取。
為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：
本發明所用的利巴韋林生產菌，是將以枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis 168(ATCC23857))基因組為模板擴增表達的PNPase基因pupG(核苷酸序 列為序列表<400>1所示序列)，與pET-His質粒連接轉入Escherichiacoli BL21(DE3)(CICC23796)中，獲得的大腸桿菌重組菌BL21/pET-His-pupG。
一種利巴韋林的制備方法，具體方法為：
(1)以基因工程菌BL21/pET-His-pupG為菌種，使用發酵罐培養，獲得 細胞；
(2)使用明膠包埋細胞，制成固定化重組表達PNPase的全細胞作為催 化劑，經酶促反應得到利巴韋林轉化液；
(3)利巴韋林轉化液提取
a.對利巴韋林轉化液8000r/min離心5-10min，獲得上清液，將上清 液加熱至60-80℃，使用1-2％的活性炭脫色20-40min，過濾得濾清液；
b.將濾清液減壓蒸發濃縮至1/4-1/3，在0-4℃結晶10-12h，過濾析 出的鳥苷，繼續濃縮至利巴韋林即將析出為止，加入純乙醇，至乙醇終濃度 90％左右，利巴韋林濃度35-45g/L，在85-95℃加熱，充分攪拌溶解利巴韋林，趁熱過濾，將上清在0-4℃結晶1-2d，過濾制得利巴韋林結晶；
c.將利巴韋林晶體重新溶解于90％的乙醇，利巴韋林濃度35-45g/L， 85-95℃加熱溶解過濾，0-4℃結晶10-12h，即重結晶，經過兩次重結晶后，離心分離、干燥即可得到利巴韋林純品。
吳麗君等人研究了抗病毒藥物利巴韋林的腸道滲透性。方法：采用外翻腸囊法和Caco-2單層細胞模型，收集利巴韋林給藥后不同時間點的腸囊液及Transwell小池基底端的接收液，用高效液相色譜儀進行檢測，計算藥物的表觀滲透系數(Papp);并以高滲透性藥物酒石酸美托洛爾為模型藥物，用相同的方法測定其滲透性，以此為參照對利巴韋林的滲透性進行分析。
結果：外翻腸囊實驗結果顯示，利巴韋林的藥物濃度對其Papp無影響，為被動轉運，且藥物的吸收無明顯的腸段特異性，利巴韋林在腸道的Papp低于酒石酸美托洛爾。Caco-2單層細胞模型實驗結果顯示:利巴韋林的Papp值也低于酒石酸美托洛爾。結論：采用外翻腸囊法和Caco-2單層細胞模型測得利巴韋林的腸道滲透性低于酒石酸美托洛爾。
王建山研究了復方鱉甲軟肝片、利巴韋林及聚乙二醇干擾素α-2b注射液聯合治療慢性丙型肝炎的臨床效果。方法：選取河南省鄭州市第六人民醫院2016年7月耀2017年3月治療的慢性丙型肝炎患者64例，依照治療方案分為對照組(n=32)與觀察組(n=32)。
對照組給予聚乙二醇干擾素α-2b注射液聯合利巴韋林治療，觀察組給予復方鱉甲軟肝片、利巴韋林及聚乙二醇干擾素α-2b注射液聯合治療。觀察比較兩組臨床療效與治療前后肝功能指標[谷丙轉氨酶(ALT)、臟硬度值(LSM)]。結果：兩組臨床療效無明顯差異(P>0.05)；治療后觀察組ALT、LSM低于對照組(P<0.05)。結論:復方鱉甲軟肝片、利巴韋林及聚乙二醇干擾素α-2b注射液聯合治療慢性丙型肝炎，能改善肝功能，療效顯著。
[1]CN201610060219.X 一種利巴韋林的制備方法
[2]吳麗君，王穎，李志琳，鄧黎，賀英菊.利巴韋林腸道滲透性的研究[J].華西藥學雜志，2019(03):1-3.
[3]王建山.復方鱉甲軟肝片聯合聚乙二醇干擾素ɑ-2b注射液及利巴韋林治療32例慢性丙型肝炎的臨床研究[J].北方藥學，2019，16(06):81-82.
[4]余靜，付青青.金蓮花顆粒聯合利巴韋林治療小兒手足口病的臨床研究[J].現代藥物與臨床，2019，34(04):1050-1053.