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13952-84-6/仲丁胺的防腐作用及其殘留檢測方法

概述及背景

仲丁胺(2一AB)是一種保護性殺菌劑,對多種真菌有抗菌活性可用作蒜 薹、青椒、柑橘、葡萄的貯藏期防腐保鮮劑。首先,在歐洲得到廣泛應用,我國自1976年開始應用。國內外尚未見2一AB致癌和誘變作用的報道,但是,美國已將其對人體健康的危害等級定為三級,并對其應用范圍和最大允許殘留量作了規定。已有諸多學者對其在果品和蔬菜中殘留量的檢測技術進行了研究。

仲丁胺的防腐作用[2][3]

仲丁胺是一種具有氨臭味的無色易揮發液體,能與水和多種有機溶劑混溶。1964年Eckert等人 用2一AB的磷酸鹽對31種病原微生物,包括半知菌類、子囊菌和藻狀菌綱的真菌以及細菌進行了抑菌實驗,發現其中7 種病原真菌對2一AB磷酸鹽敏感,2一AB濃度為50~100 弘g/ml(微克/毫升)時,即可阻止菌絲生長達50%;5種真菌比 較敏感,2一AB濃度為250 vg/ml(微克/毫升)時,可阻止菌絲生長達50%;細菌對2一AB磷酸鹽不敏感。同時,還發現2 一AB鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、丙酸鹽和檸檬酸鹽的 效果無明顯差異。

Graham(1970)報道,用2一AB熏蒸馬鈴薯, 對Helminthosporium Solani(長蠕孢霉屬真菌)引起的銀粗皮 病也有很好的效果【2J。可見,仲丁胺對多種真菌具有抗菌活 性,可以用來處理果品蔬菜,防止因真菌侵染造成的產品腐爛 變質。1975年,聯合國糧農組織(FAo)和世界衛生組織 (WHO)推薦將2一AB應用于柑橘的采后防腐保鮮,并指出 對控制蘋果、梨、桃及香蕉的采后病害同樣有效。 2仲丁胺的毒理學評價 1967年,Eli用含有不同劑量2一AB的飼料喂養哺乳期 的奶牛,然后檢測它們的糞便、血液、牛奶、尿、肝臟、腎臟、脂 肪和肌肉中2一AB殘留量,發現這些組織中的2一AB含量與 飼料中2一AB的添加量有劑量關系,2一AB可以被吸收到牛 奶和尿液里,但在牛奶中的殘留量很低。雖然實驗組的瘦肉 中2一AB殘留量并沒有明顯高于對照組,但是在腎臟和肝臟中有明顯的2一AB殘留。2一AB易于被吸收,并且大部分都 隨尿液排出。

在哺乳期奶牛的投喂實驗中,對投喂了2一AB的奶牛進行體內檢測,結果表明主要殘留于腎臟中,肝臟中也有一定殘留。 在制定ADI之前。美國進行了一系列動物試驗,結果表明在以下水平內不會發生毒理學反應:鼠:35 mg/kg(毫克/公 斤)體重(63 mg(毫克)醋酸鹽/kg(公斤)體重)。狗:69 mg/kg (毫克/公斤)體重(125 mg(毫克)醋酸鹽/kg(公斤)體重)。

由于缺乏人體的臨床實驗結果,在1975年的FAO和 WHO聯合會議上,人體ADI值暫時定為0.2 mg/kg(毫克/公 斤)體重,同時規定了在柑橘和柑橘制品中2一AB的最大殘 留量為:干制柑橘果肉及糖蜜為50 mg/kg(毫克/公斤),柑橘果實為30 mg/kg(毫克/公斤),柑橘果汁為0.5 mg/kg(毫克/ 公斤)。美國將仲丁胺列入農藥范疇,規定其在食品中的殘留 限量為柑橘類果實(采用過含仲丁胺類保鮮劑)30 mg/kg(毫 克/公斤)、牛腎3 mg/kg(毫克/公斤)、乳和肉及牛副產品(除 牛腎)O.75 mg/kg(毫克/公斤)、柑橘糖漿50 mg/kg(毫克/公 斤),干制柑橘果肉50 mg/kg(毫克/公斤)。關于2一AB有無 三致(致癌、致畸、致突變)危險,還需作進一步的代謝實驗。

我國自1976年河北農業大學首次合成含2一AB的防腐保鮮劑以來,全國許多單位相繼開展了相關研究,已經證明,2一 AB對貯藏期間果品蔬菜的防腐保鮮作用。GB2760—1996 (~2002)食品添加劑使用衛生標準規定仲丁胺殘留標準為: 柑橘(果肉)0.005 mg/kg,荔枝(果肉)0.009 mg/kg,蘋果(果 肉)0.001 mg/kg,蒜薹和青椒3 mg/kg(毫克/公斤)

仲丁胺殘留量檢測方法[4]

仲丁胺保鮮劑的應用,可以延長果蔬產品的貯藏期。采用適宜的檢測方法監測果蔬產品中仲丁胺的殘留量,對保證仲丁胺保鮮劑安全使用十分必要。 目前,2一AB殘留量檢測方法主要有以下幾種。

1.氣相色譜法(GC)

應用氣相色譜法檢測2一AB殘留量,最早是由McIntire (1953)提出的。之后經過Kolbezen(1962)和Day(1966,1968) 的三次改進得以完善。這種方法的原理是:利用水蒸汽蒸餾, 將2一AB從樣品中分離出來,用四氯化碳洗滌后以2,4一二 硝基氟苯(2,4一dinitrofluorbenzene,簡稱DNFB)衍生,生成衍 生產物N一仲丁基一2,4一二硝基苯胺(N—butyl一2,4一 dinitroaniline,簡稱BDNA),經薄層分離后,再經氣相色譜儀 測定,根據保留時間和峰面積進行定性和定量分析。該方法 的回收率為80%~100%,檢測限為0.1 mg/kg(毫克/公斤)。

Hoshika Y等用該方法分析了包括仲丁胺異構體在內的13種 低級脂肪胺,得到很好的分離分析效果。Petro--TurzaM等 用氣相色譜法檢測了馬鈴薯及其產品中仲丁胺殘留量,均得 到較好的分析效果。1985年,楊文熙等提出了直接氣相色譜法檢測低級脂肪胺。但由于載體對胺的吸收作用以及胺在柱內可能產生的分 解,檢出峰有拖尾現象,準確度較差,測定誤差較大,有待改進。

2.薄層掃描法(TLS)

1985年,甄增立提出用2,4一二硝基氟苯(2,4一dini. trofluorbnzene,簡稱DNFB)衍生薄層掃描法,檢測蒜薹中2一 AB殘留量。該方法的樣品前處理、衍生反應及薄層分離沿用 了Day等人的方法,但直接采用薄層掃描儀進行定量測定。 崔同應用自行合成的對酞內酰胺苯磺酰氯(Phisyl一a)為衍 生劑衍生2一AB,取得了滿意的結果。該類方法在薄層分離 后直接采用薄層色譜儀進行定量測定,避免了薄層分離后的 解吸處理,簡化了檢測程序,減少了待測成分的損失。該法的 回收率一般在90%以上。

3.高效液相色譜法(HPLC)

由于2一AB沒有合適的生色基團用于最終檢測,目前應用的高效液相色譜技術多采用柱前衍生法。所用衍生劑一般具有較強的紫外吸收基團或發射熒光基團,可以與2一AB的 一NH2基反應生成相應的衍生物。用于2一AB檢測的衍生劑有丹磺酰氯、熒光胺和對酞內酰胺苯磺酰氯【5J。丹磺酰氯 (Dansyl chloride)是5一甲氨基萘一1一磺酰氯的簡稱,是一種 強熒光劑,能專一性地與2一AB的一NH2基反應生成丹磺酰 一肽,后者水解生成的丹磺酰一氨基酸可發射很強的熒光,用 熒光檢測器檢測。丹磺酰氯衍生試劑的衍生產物穩定,于暗 處4℃保存一個月損失率不超過10%,檢測靈敏度也較高, 最低檢出限可達O.2 mg/kg(毫克/公斤)。但衍生反應所需 時間較長,一般需要1 h(小時)左右。熒光胺只能與伯胺反 應,因此,該衍生試劑比丹磺酰氯更具選擇性,且衍生反應迅 速,衍生所需時間較丹磺酰氯法短,最低檢出限為0.1 mg/kg (毫克/公斤),平均回收率為99%。崔同等研究了對酞內酰 胺苯磺酰氯(Phisyl—C1)的合成及其性質,以及它與胺類化合 物的衍生反應【7J。證明該法測定結果的線性范圍接近丹磺酰 氯衍生法,而且衍生時間短,只需普通的紫外檢測器即可,最 低檢出限為0.17 mg/kg(毫克/公斤),平均回收率為91.3%。 但該法中的衍生試劑目前尚未形成商品化試劑。與氣相色譜 法相比,該類方法簡化了檢測程序,且重現性好,最大缺點是 衍生試劑丹磺酰氯和熒光胺不易獲得,且價格昂貴。

參考文獻

[1]陳治遠.仲丁胺系列保鮮劑的研究與應用[J].山西果樹,1995.

[2] 葉鳳閣,張忠源.仲丁胺抑菌作用及其機理[J].北方園藝,1991.

[3] 凌關庭。唐述潮,陶民強.食品添加劑手冊[J].化學工業出版社.2003,1127.

[4] 丁雅韻,謝盂峽,鄧志威.丹磺酰氯作為氮基酸柱前衍生試劑衍生條件的研究.北京師范大學學報,2001。37(4):526.