1088-56-8 / 光黃素的應用

背景及概述^[1][2]

光黃素為核黃素的分解產物。核黃素營養狀況的常用評價方法是測定尿中核黃素含量。尿中核黃素的測定方法有微生物法、高效液相色譜法和熒光法上等，微生物法手續繁瑣，僅在早年使用，現已不用。高效液相色譜法不成熟，且需要一定的設備，成本高、速度慢。

目前我國常用硅鎂吸附劑凈化熒光法，此法測定過程要求避光并盡快完成，操作條件難控制，并且效率低，大批量測定較困難。尿中核黃素大多以游離形式存在，游離核黃素對光極為敏感，堿性條件下光照下即分解產生光黃素，光黃素的三氯甲烷溶液具有較強的熒光發射，在250 nm 內熒光強度是穩定的，且不受光的影響，故可在最佳激發波長450 nm、最大發射波長5 10 n m處測定。

結構

應用^[1-2]

光黃素主要被用作分析試劑。其應用舉例如下：

1. 光黃素熒光法測定尿中核黃素。

光黃素熒光法測定食品中核黃素，所用的核黃素標準液濃度為100 g/m1，濃度較高以至于核黃素不能完全溶解；有實驗所用方法中，核黃素標準貯備液及核黃素標準工作液的配制沿用硅鎂吸附劑凈化熒光法中核黃素標準液的配制，因其濃度小，核黃素完全溶解。用此方法與硅鎂吸附劑凈化熒光法測定尿中核黃素含量，結果經兩樣本資料檢驗，表明兩種方法測定結果無顯著性差異。

此方法與硅鎂吸附劑凈化熒光法比較：

(l) 硅鎂吸附劑凈化熒光法要求始終在暗室進行，并且熱蒸餾水溫度應始終控制在50 ℃-60 ℃，操作條件難控制；光黃素熒光法只要求在避光條件下進行。

(2) 硅鎂吸附劑凈化熒光法中，尿樣要硅鎂吸附劑，由于尿中雜質干擾，尿樣過柱速度不同，個別樣品速度很慢，影響整批樣品測定進程；光黃素熒光法反應速度是相同的，可以進行整批樣品的測定。

(3) 硅鎂吸附劑凈化熒光法要求試驗結束后盡快測定，以免游離核黃素見光分解，造成結果偏差；光黃素熒光法中，光黃素的三氯甲烷溶液最長在25 0min 內熒光強度穩定，而且不受光影響，所以可以在放置時間內進行下一批操作，節省時間。

(4) 硅鎂吸附劑凈化熒光法每批最多只能測定20 個樣品，時間約為3 h，效率低，光黃素熒光法每批測定20 個，可以在照射60min 時和樣品處理完放置時進行下一批操作，大大節省時間，平均每批可以在l h 內測完。

本法是由光黃素熒光法測定食品中核黃素改進而來，故在測定尿中核黃素含量時，由于尿液樣品保存于酸性環境中，必須對氫氧化鈉加入量進行調整，使核黃素光解完全。

2. 光黃素熒光法測定保健食品中的維生素B2。

食品中天然存在的維生素B2 一般呈結合形式，與磷酸和蛋白等結合成復合化合物。此種結合型維生素B2 對光比較穩定。國標法測定維生素B2 即是針對食品中天然存在的維生素B2 而制定的，由于食品成分比較復雜，試樣處理繁瑣費時。

而保健食品中的維生素B2 大多以游離形式存在，且試樣成分相對簡單，如采用國標法測定既耗時又費試劑。游離維生素B2 對光極為敏感，光照下即分解產生光黃素。有研究參考日本衛生試驗法食品中維生素B2 的測定方法，利用維生素B2 分解為光黃素這一反應，以光黃素熒光法定量測定保健食品中的維生素B2 含量，方法簡便、快速，且準確度及精密度都能滿足分析要求。

測定方法^[3]

光黃素測定方法：取光黃素對照品10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入水約50 mL及冰醋酸1 mL后超聲(功率120 W，頻率40 kHz)處理5min，置70 ℃水浴至溶解，冷卻至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，精密移取1 mL置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得光黃素對照品溶液；精密稱取各批樣品適量，同法制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得供試品溶液。精密量取光黃素對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約達滿量程的20%；再準確量取光黃素對照品溶液和供試品溶液各20 μL注入液相色譜，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍。

主要參考資料

[1] 羅仁才, 黃磊, 王正, 等. 光黃素熒光法測定尿中核黃素的研究[J]. 營養學報, 2004, 26(5): 396-399.

[2] 王永芳, 李敏. 光黃素熒光法測定保健食品中的維生素 B2 的方法研究[J]. 中國食品衛生雜志, 2000, 12(2): 20-22.

[3] 張紅霞, 黃榮清, 肖炳坤, 等. 核黃素, 光黃素, 光色素及其他有關物質的高效液相色譜測定[J]. 藥物分析雜志, 2010 (1): 67-70.