129311-55-3 / 加尼瑞克藥理作用

背景及概述^[1]

加尼瑞克由默沙東公司(在美國和加拿大被稱為默克)研發、生產。2013年經中國國家食品藥品監督管理總局批準在中國上市。加尼瑞克是一種促性腺激素釋放激素(GnRH)的拮抗劑，是一種合成十肽，對天然生成的促性腺激素釋放激素(GnRH)具有高的拮抗活性。可競爭性阻斷垂體促性腺細胞上的GnRH受體，以及其后的轉導通路，從而產生一種快速、可逆的促性腺激素分泌抑制作用。在輔助生殖醫學控制性促排卵治療中，用于拮抗劑方案。

結構式

藥理作用^[2]

促性腺激素釋放激素(GnRH)的脈沖式釋放能夠刺激LH和FSH的合成和分泌。卵泡期中期和后期的LH脈沖頻率大約是每小時1次。這些脈沖體現在血清LH的瞬時上升。在月經中期，GnRH的大量釋放造成LH激增。月經中期的LH激增能引起數個生理反應，包括：排卵、卵母細胞減數分裂恢復和黃體形成。黃體形成造成血清黃體酮水平上升，同時雌二醇水平下降。醋酸加尼瑞克是GnRH拮抗劑，可競爭性阻斷垂體促性腺細胞上的GnRH受體，以及其后的轉導通路。它產生一種、可逆的促性腺激素分泌抑制作用。醋酸加尼瑞克對腦垂體LH分泌的抑制作用強于對FSH的抑制作用。醋酸加尼瑞克不能引起內源性促性腺激素的釋放，這與拮抗作用一致。醋酸加尼瑞克停藥后48小時內，垂體LH和FSH水平可完全恢復。

適應癥^[2]

在接受輔助生殖技術(ART)控制性卵巢刺激(COS)方案的婦女中使用，用于預防過早出現促黃體激素(LH)峰。

給藥方法^[2]

加尼瑞克應皮下注射，是在大腿部。為防止皮下脂肪萎縮，應循環更換注射部位。如果能對患者或其伴侶給予充分指導，并可獲得專家建議，可以自行注射加尼瑞克。

制備^[1]

步驟1：肽樹脂1的合成

取0.15molFmoc-D-Ala和0.15molHOBt，用適量DMF溶解；另取0.15molDIC，攪拌下慢慢加入至保護氨基酸DMF溶液中，于室溫環境中攪拌反應30分鐘，得到活化后的保護氨基酸溶液，備用。取0.05mol的Fmoc-RinkAmideAM樹脂(取代值約0.6mmol/g)，采用1000mL20％PIP/DMF溶液去保護25分鐘，洗滌過濾得到去Fmoc的樹脂。將活化后的Fmoc-D-Ala溶液加入到已去Fmoc的樹脂中，室溫攪拌反應6小時，抽掉反應液，DMF洗滌3次后，DCM洗滌3次，甲醇洗滌3次，每次洗滌時間為3min，得到Fmoc-D-Ala-RinkAmideAM樹脂，即肽樹脂1。

步驟2：加尼瑞克樹脂的合成

取0.1molFmoc-Pro和0.1molHOBt，用適量DMF溶解；另取0.1molDIC，攪拌下慢慢加入，于室溫環境中攪拌反應30分鐘，得到活化后的氨基酸溶液，備用；取0.05mol步驟1的肽樹脂1，采用1000mL20％PIP/DMF溶液去保護25分鐘，洗滌過濾得到去Fmoc的肽樹脂1；將活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽樹脂1中，偶聯反應60～300分鐘，反應終點以茚三酮法檢測為準，過濾洗滌，得肽樹脂2，Fmoc-Pro-D-Ala-RinkAmideAM樹脂。按照上述合成肽樹脂2的方法將剩余氨基酸依次連接(加尼瑞克C段到N端順序，每次連接對應獲得肽樹脂3、4、5、6、7、8、9)：Fmoc-Pro、Fmoc-Har(Et₂)、Fmoc-Leu、Fmoc-D-Har(Et₂)、Fmoc-Tyr(tBu)、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-D-Pal、Fmoc-D-Cpa和Ac-D-Nal，獲得加尼瑞克樹脂，Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Har(Et₂)-Leu-Har(Et₂)-Pro-D-Ala-RinkAmideAM樹脂。

步驟3：加尼瑞克粗品的制備

取步驟2制得的加尼瑞克肽樹脂，加入體積百分比為90％的TFA、體積百分比為5％的EDT、余量為水組成的混合酸解液酸解(混合酸解液10mL/克加尼瑞克樹脂)，攪拌均勻，室溫攪拌反應3小時，反應混合物使用砂芯漏斗過濾，收集濾液，樹脂再用少量TFA洗滌3次，合并濾液后減壓濃縮，加入無水乙醚沉淀，再用無水乙醚洗沉淀3次，抽干、得類白色粉末即為加尼瑞克粗品，粗品純度為82.7％。

步驟4：加尼瑞克粗品純化

取步驟3所得加尼瑞克粗品，用純化流動相A溶解，溶液用0.45μm微孔濾膜過濾，純化備用；采用高效液相色譜法進行純化，純化用色譜填料為10μm的反相C18，流動相系統為0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色譜柱流速為90mL/min，采用梯度系統洗脫，循環進樣純化，取粗品溶液上樣于色譜柱中，啟動流動相洗脫，收集主峰蒸去乙腈后，得加尼瑞克純化中間體濃縮液；取加尼瑞克純化中間體濃縮液，用0.45μm濾膜濾過備用；采用高效液相色譜法進行換鹽，流動相系統為1％醋酸/水溶液-乙腈，純化用譜填料為10μm的反相C18，77mm*250mm的色譜柱流速為90mL/min，采用梯度洗脫，循環上樣方法，上樣于色譜柱中，啟動流動相洗脫，采集圖譜，觀測吸收度的變化，收集換鹽主峰并用分析液相檢測純度，合并換鹽主峰溶液，減壓濃縮，得到加尼瑞克醋酸水溶液，冷凍干燥，得加尼瑞克純品48.1g，總收率為61.3％，分子量：1570.8，純度：99.5％，最大單一雜質0.11％，未知最大單雜小于0.10％。

主要參考資料

[1] CN201410596912.X一種合成加尼瑞克的方法

[2] 加尼瑞克說明書