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L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽是合成烏苯美司的起始原料。烏苯美司是氨基肽酶 N( CD13) 和亮氨酸氨基 肽酶的抑制劑，可通過增強宿主免疫功能、抑制腫瘤細胞生長及誘導腫瘤細胞凋亡等發揮抗腫瘤作用。通過采用全合成方法制備烏苯美司，L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽是合成烏苯美司的起始原料，其光學純度將直接影響烏苯美司的光學純度。
因此必須對其對映異構體的含量進行控制，從而控制烏苯美司的光學純度，確保產品質量。由于 L-亮氨酸叔酯鹽酸鹽結構中只有一個發色團羰基，使用常規的紫外檢測器難以檢測。通過參考相關文獻，采用 Nα-( 2，4-二硝基-5-氟苯基) -L-丙氨酰胺( Marfey 試劑) 作為柱前衍生試劑，建立柱前衍生化-高效液相色譜法( HPLC) 測定 L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽的對映異構體的方法，能快速、簡便、有效地對異構體雜質進行分析檢測。
L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽是合成烏苯美司的起始原料。其應用舉例如下：合成烏苯美司，以(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸為原料，與二碳酸二叔丁酯反應，且二碳酸二叔丁酯采用分批逐次的加入方式，制備獲得中間體I，中間體I與L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽反應制備獲得中間體II，其中L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽作為優選，有利于提高中間體II的收率和純度，中間體II在酸堿體系下分別脫去保護基團叔丁氧羰酰基和叔丁酯，此操作只需通過酸堿體系調節酸堿值就能有效將保護基團高效脫去，提高烏苯美司成品的收率和純度。所述工藝路線如下：
(1)制備中間體I(2S，3R)-叔丁氧羰基-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸
將原料(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸用水溶解，加入10％ 兩相溶劑，且用堿水調PH至大于8，分批逐次加入二碳酸二叔丁酯，且溶液PH維持在大于8，加入乙酸乙酯，調PH至1—3，萃取分層 收集有機相，干燥，濃縮結晶，即得；為了提高中間體I的收率純度，在中間體I的制備過程中，經多次反復試驗發現，原料(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸經水溶解、加入10％兩相溶劑，堿水調節PH處理步驟后，加入二碳酸二叔丁酯，其中二碳酸二叔丁酯的加入方式直接影響中間體I的收率，如果采用直接投入二碳酸二叔丁酯與原料(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4- 苯基丁酸反應，收率較低，當采用分批逐次加入二碳酸二叔丁酯時，中間體I的反應收率顯著增加。
在中間體I的制備過程中，制備工藝所采用的兩相溶劑為丙酮、甲醇、四氫呋喃中的任意一種；所采用的堿水調PH，堿水為碳酸鈉水溶液、氫氧化鈉水溶液、三乙胺中的任意一種。中間體I的整個制備反應過程均在室溫下進行，收率為92％。
(2)制備中間體IIN-[(2S，3R)-3-叔丁氧羰基氨基-2-羥基-4- 苯基丁酰基]-L-亮氨酸叔丁酯
將中間體I及L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽加入四氫呋喃中，冰浴下攪拌后依次加入1-羥基苯并三唑，三乙胺，二環己基碳二亞胺，攪拌過夜，濾除析出的二環己基脲，濾液減壓濃縮，用乙酸乙酯溶解后， 依次用稀酸、飽和食鹽水洗滌后，用無水硫酸鈉干燥，濃縮，石油醚打漿，抽濾即得。
本實驗中操作步驟中石油醚打漿是指采用石油醚精制的實驗過程，具體是指在濃縮操作后，加入有機溶劑石油醚，升溫將固體溶解，攪拌，使溶液在冰水浴中降溫，有固體析出時，抽濾即得。中間體I制備中間體II的過程中，為了提高中間體II的收率和純度，原料優選L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽與中間體I反應。步驟(2)中中間體I制備中間體II的過程中所采用的L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽的制備步驟為：
在1000ml三口瓶中加入100gL-亮氨酸，280ml醋酸叔丁酯，114g 高氯酸，在10℃左右攪拌反應36小時，然后加入280ml水，緩慢加入固體碳酸氫鈉中和體系，有大量氣泡產生；然后調節PH至7左右，過濾分層，水相用100ml醋酸叔丁酯萃取一次，合并有機相，加入 100ml飽和碳酸氫鈉水溶液攪拌10分鐘，分層后有機相依次用100ml 飽和碳酸氫鈉水溶液、100ml飽和食鹽水沖洗，然后用無水硫酸鈉干燥；在55℃下減壓濃縮，加入200ml石油醚，冰浴下緩慢滴加乙酸乙酯/氯化氫調PH至5，攪拌30分鐘后過濾，濾餅用50ml石油醚沖洗后烘干，即得產品，產品外觀為白色結晶，收率為29.4％。
(3)由中間體II制備烏苯美司
將所述步驟(2)制備的中間體II用乙醇溶解后，用鹽酸調節 PH至1—2，40℃-50℃下攪拌反應4—5小時，體系降至10℃以下，緩慢滴加氫氧化鈉溶液，調PH至8以上，過夜，調PH至6—7，減壓濃縮，殘渣中加入水，4℃—6℃下攪拌結晶，過濾，用1mol/L鹽酸溶解，加入少量活性炭，濾除不溶物，用稀氨水調PH5—6，過濾，濾餅用丙酮洗滌，干燥即得。
在本實驗步驟中，主要采用脫保護劑將叔丁氧羰酰基、叔丁酯脫去，反應過程很難控制，脫保護劑有多種，優選酸堿脫去，酸堿分別 為稀鹽酸、氫氧化堿，在本實驗中，中間體II用乙醇溶解后，用鹽酸調節PH至1—2，反應后，待溫度降低至10℃以下后，采用氫氧化鈉溶液調PH至8以上，且采用緩慢滴加氫氧化鈉的方式，與其他脫保護劑相比，該酸堿脫保護劑制備獲得的烏苯美司成品的收率和純度最佳。
[1] 柱前衍生化法測定 L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽的對映異構體
[2] CN201410784653.3一種烏苯美司的新型合成工藝