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D-氨基葡萄糖硫酸鹽最早收載于美國藥典27版,是一種治療關節炎的藥物。關節炎已成為世界頭號致殘疾病,隨著關節炎疼痛的加劇和活動受阻,將導致暫時或永久的失去工作能力。給社會和經濟方面帶來重大損失,D-氨基葡萄糖硫酸鹽因為活性高,易吸收,是關節軟骨和關節液的主要基質,越來越多地廣泛應用于治療關節炎疾病。
一種D-氨基葡萄糖硫酸鹽的檢測方法,其步驟如下:
(1)溶解:取D-氨基葡萄糖硫酸鹽,在0℃下,溶于溶劑中;所述的溶劑為飽和硫酸銨溶液或者二甲亞砜;D-氨基葡萄糖硫酸鹽與溶劑的重量體積比為100mg:1ml;溶液過濾,得到固體;
(2)檢測:將所得固體,按氯化鉀(或氯化鈉)和硫酸鉀(或硫酸鈉)的檢測方法,檢測氯離子和硫酸根離子;所述的氯離子、硫酸根離子的檢測方法均按《中國藥典》2010年版二部附錄ⅧA氯化物檢查法,附錄ⅧB硫酸鹽檢查法;
(3)判定:通過上述檢測氯離子和硫酸根離子的結果,將不同方法制備的D-氨基葡萄糖硫酸鹽區分開;
在飽和硫酸銨溶液中,完全溶解的為D-氨基葡萄糖硫酸氯化鉀鹽或者D-氨基葡萄糖硫酸氯化鈉鹽,有不溶解物且為硫酸鉀的,原物是D-氨基葡萄糖鹽酸鹽硫酸鉀混合物,有不溶解物且為硫酸鈉的,原物為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽硫酸鈉混合物;
在二甲亞砜中溶解,不溶物為氯化鉀的,原物為D-氨基葡萄糖硫酸氯化鉀鹽;不溶物為氯化鈉的,原物為D-氨基葡萄糖硫酸氯化鈉鹽;
在二甲亞砜中溶解,不溶物為硫酸鉀的,原物為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽硫酸鉀混合物;不溶物為硫酸鈉的,原物為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽硫酸鈉混合物。
一種用高效液相色譜法檢測氨基葡萄糖硫酸鹽的方法,具體包括以下步驟:
步驟1,配制標準品溶液,稱取氨基葡萄糖硫酸鹽標準品10mg,置于50ml容量瓶中,加水適量,經超聲波振蕩溶解,冷卻至室溫,用水定容,經水系膜過濾后即得;
步驟2,配制待測樣品溶液,稱取氨基葡萄糖硫酸鹽待測樣品10mg,置于50ml容量瓶中,加水適量,經超聲波振蕩溶解,冷卻至室溫,用水定容,經水系膜過濾后即得;
步驟3,分別將標準品溶液和待測樣品溶液注入高效液相色譜儀,在同樣的色譜條件下,記錄色譜圖和峰面積,采用外標法計算待測樣品中氨基葡萄糖硫酸鹽的含量。
進一步的,所述色譜條件包括色譜柱、流動相、流速;所述色譜柱采用色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱,優選為博納艾杰爾Agela色譜柱VenusilC18Plus,色譜柱長度為250mm,內徑為4.6mm,其填料粒徑為5um;所述流動相由流動相a、流動相b、流動相c組成,所述流動相a為乙腈,所述流動相b為0.005%-0.009%的烷基磺酸鈉溶液,所述的烷基磺酸鈉可以是庚烷磺酸鈉、戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉任意一種或多種的混合物,所述流動相c為5%-12%的三乙胺溶液,所述流動相的體積配比為Va:Vb:Vc=9:90:1,所述流動相的用磷酸調節pH值為3.0-4.0;所述流速為0.6-1.0mL/min。
進一步的,外標法計算待測樣品中氨基葡萄糖硫酸鹽的含量的公式為:X(%)=C對×A樣/A對/C樣×100;
C對為標準品溶液中氨基葡萄糖硫酸鹽的濃度,單位為mg/ml;
A對為標準品溶液色譜圖的峰面積或峰高;
A樣為待測樣品溶液色譜圖的峰面積或峰高;
C樣為待測樣品溶液中待測溶液的濃度,單位為mg/ml。
[1] [中國發明,中國發明授權] CN201210388944.1 一種D-氨基葡萄糖硫酸鹽的檢測方法
[2] [中國發明] CN202011057732.6 一種用高效液相色譜法檢測氨基葡萄糖硫酸鹽的方法