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隨著營養科學的發展,測定谷物、食品及飼料中的蛋白質、賴氨酸的含量需要一種準確、簡易、快速、低消耗的分析方法來達到盡快的篩選出高蛋白、高賴氨酸的親本材料。藏花橙G即6-羥基-5-(苯偶氮基)-2-萘磺酸,作為染色劑在著色法(簡稱DBC法)中的應用,不僅使作物蛋白質的分析和土壤中含氮元素與賴氨酸的測定工作變得簡易、準確、快速,并成功地應用于麥類、玉米、高粱、小米、大豆和稻谷等作物蛋白質的分析,因而該化合物被引起了足夠重視。隨著測定蛋白質、賴氨酸的DBC法的標準化和推廣應用,對染色劑藏花橙G的需求量日益增加,不僅要研制出不含有色雜質的高含量試劑,而且要提供一個能批量生產的合理 工藝,以滿足國內市場需求。
藏花橙G主要作為染色劑使用,其應用舉例如下:制備一種蛋白質的檢測試劑,該試劑以重量百分比,取0.1~10份的藏花橙G溶解在1~500份的磷酸緩沖溶液中,再加入1~500份的冰醋酸,最后用1~5000份的水稀釋,振蕩混合則得到所述的蛋白質的檢測試劑。與傳統方法相比它可以有效檢測真蛋白質含量,能夠在較寬的范圍內進行蛋白質的檢測,非蛋白質含氮化合物如尿素、三聚氰胺等基本不干擾檢測的準確性。
一種藏花橙G的制備方法,原料配比:
具體操作步驟如下:
1)磺化:在裝有攪拌器、溫度計、冷凝器的反應瓶中加入加入1305ml濃硫酸,水浴上加熱至90℃,在攪拌下分批加入900g β-萘酚,反應溫度不超過90℃,加完后升溫到100 ℃,攪拌1小時,降溫至25℃,用10N氫氧化鈉調PH=7.8,消耗3920ml氫氧化鈉溶液,過濾析出的白色沉淀為粗品,用6000ml蒸餾水進行重結晶得到白色片狀結晶為β-萘酚-6-磺酸鈉,置于干燥箱中干燥,溫度不能超過110℃,干燥后重量約為443g。
2)重氮化:在裝有攪拌器、溫度計、滴液漏斗的反應瓶中將51ml苯胺與40ml水的溶液與129ml濃鹽酸混合生成苯胺鹽酸鹽,用冰鹽浴冷卻至0℃;另將36g亞硝酸鈉溶于87ml 水中用冰鹽浴冷卻至0℃以下,將此溶液慢慢滴加到苯胺鹽酸鹽中,溫度不超過5℃。當快滴完時用淀粉碘化鉀試制檢驗終點,試紙變為藍色即停止滴加亞硝酸鈉溶液,此時生成的氯化重氮苯為亮黃色的透明溶液,再繼續攪拌0.5小時,于0--5℃保存待用。
3)偶合:在裝有攪拌器、溫度計、滴液漏斗的反應瓶中將磺化生成的β-萘酚-6-磺酸鈉 120g溶于事先配好的180g碳酸鈉的6000ml水溶液中,PH=10.5,降至0℃,慢慢滴加氯化重氮苯,溫度維持在0--3℃,反應中PH保持在8-9。滴完后用鹽酸調PH=4.5,繼續攪拌 1小時,過濾得到紫紅色的粗品染料150g,用2250ml乙醇重結晶后純品在真空干燥箱中 60℃干燥得到成品藏花橙G約120g。
[1] CN201110225287.4 藏花橙G的制備方法
[2] CN200910012461.X一種蛋白質的檢測試劑、檢測方法及檢測儀