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121-34-6 / 香草酸的應用

背景[1][2]

香草酸系統名“4-羥基-3-甲氧基苯甲酸”。分子式C8H8O4。分子量168.14。白色針狀晶體。無氣味,能升華,不分解。熔點210℃。易溶于乙醇,可溶于乙醚,微溶于水。與三氯化鐵作用不顯色。香草酸是胡黃連有效成分之一。胡黃連苷類的結構中分別含有香草酸基、阿魏酸基和桂皮酰基,水解后即為香草酸、阿魏酸和肉桂酸,香草酸是胡黃連的抗菌成分之一,測定其所含的香草酸量,可以作為衡量胡黃連質量的指標。

目前市場上的香草酸主要來源于植物提取,生物發酵合成,化學合成等。植物提取法,原材料成本較高,且需要培育大量植物,受天氣地域等影響較大,根本無法滿足市場的需求。生物合成香草酸的工藝,受到底物、菌株和酶的限制,轉化率不高,生產工藝并未能夠得到廣泛應用。香草酸的化學合成工藝,主要以香草醛為原料,通過氧化(氧化銀)或堿熔(氫氧化鉀,240℃以下)制備,也有從3,4-二甲氧基苯甲酸部分脫去甲基而得的工藝。

其中氧化法制備面臨的成本高,污染大等缺點,不適合大規模生產。而堿熔工藝存在反應劇烈,安全性差,產能低等問題,工業應用也不廣泛。而3,4-二甲氧基苯甲酸作為原料,相比香草醛價格昂貴,也不適合大規模生產。綜上所述,現在香草酸合成工藝安全性差,產能低,收率低,操作復雜,收率及純度也較差。

結構

香草酸的應用

應用[2][3][4][5]

香草酸主要可用于香料或醫藥合成,如5-硝基香蘭酸,它可用于3,5-雙取代兒茶酚類兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT-I)抑制劑托卡朋(tolcapone)的合成,或作為合成利福霉素類抗生素(3-羥基甲氧基利福霉素,3-羥基利福霉素)生物合成的前體。

香草酸作為香莢蘭豆,香子蘭莢,胡黃連等植物的有效成分之一,國內外對其抗菌消炎,抗氧化,抑制酪氨酸酶活性,化感作用,調節神經,促凝血活性方面都有一定的研究,具有較好的活性,具有很好的市場前景。其應用舉例如下:

用于香草醛的合成。香草醛,又名香蘭素(Vanillin),化學名為3-甲氧基-4-羥基苯甲醛(3-methoxy-4-hy dro xybenzaldehyde)。是一種廣譜型高檔香料,被譽為香料之王,廣泛應用于食品、飲料、香料、醫藥等領域。年用量很大,產品多數為化學合成,純天然產品主要是從香子蘭花莢中提取,產量極少,遠遠不能滿足市場的需求。

利用微生物轉化天然前體生產的天然等同(natur-identical ,NI)的香草醛,被稱為“生物香蘭素”,則可以替代天然香蘭素。具體方法是,篩選到1 株可以轉化香草酸生成香草醛的朱紅密孔菌SW-0203,通過培養基和轉化條件的優化后,可以將1.682 g/ L 的香草酸轉化成0.875 g/ L香草醛,摩爾轉化率為57.5%。在25 L 罐上進行放大試驗,香草醛產量為0.818 g/ L,摩爾轉化率為53.7%。對轉化液中的產物進行提取,得到純度為95 %的香草醛結晶,提取收率為63.9%。

此外,有研究采用酶動力學方法研究了香草酸對酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活力的抑制效應,結果表明,香草酸對酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活性均有抑制作用,導致單酚酶活力和二酚酶活力下降50%的香草酸濃度(IC50 )約分別為1. 3 mmo l /L和2. 6 mm ol /L。

香草酸能明顯延長單酚酶的遲滯時間,2 mm o l /L香草酸能使遲滯時間由1.1 m in延長至4.7 m in。香草酸對二酚酶的抑制作用表現為混合型抑制,對游離酶的抑制常數(KI)和對酶-底物絡合物的抑制常數(KIS )分別為1. 76 mm o l /L和8. 57 mmo l /L。

另外,還有研究探討酚酸類自毒物質香草酸的自毒作用,研究其對花生種子萌發和幼苗生長的影響,揭示根際土壤微生物在花生生育期內對自毒物質的響應規律。以花生品種阜花12 號150GY 為試材,培養皿培養試驗設6 個處理:0、0.01、0.03、0.05、0.07、0.09 mmol?L-1 香草酸溶液;營養缽種植試驗設5 個處理:0、0.01、0.03、0.05、0.07 mmol?L-1 香草酸溶液;盆栽試驗設5 個處理:香草酸用量分別為0、0.01、0.03、0.05、0.07mg?kg-1干土。

分別研究外源添加香草酸對花生種子萌發、幼苗生長及根際微生物區系的影響。結果顯示:

(1)經不同濃度香草酸溶液處理后,花生種子的發芽率、發芽勢和發芽指數均低于CK,與對照存在顯著性差異。當香草酸溶液濃度為0.09 mmol?L-1 時,發芽率、發芽勢和發芽指數與對CK 相比分別降低39%、66.3%和55.9%,自毒效應響應指數達到最大值。

(2)經不同濃度香草酸溶液處理后,花生幼苗的主根長、單株干重、葉綠素含量、凈光合速率和氣孔導度均低于CK,與對照存在顯著性差異,當香草酸溶液濃度為0.07 mmol?L-1 時,各指標與對CK 相比分別降低37.3%、40.0%、19.0%、53.9%和49.1%,自毒效應響應指數達到最大值。胞間CO2 濃度變化趨勢與以上指標相反,隨香草酸濃度的增大而呈現上升趨勢,當香草酸溶液濃度為0.07 mmol?L-1 時,胞間CO2 濃度比對照提高46.1%。

(3)香草酸濃度≥0.03 mmol?L-1 時,花生根系總吸收面積、活躍吸收面積和根系活力(活躍吸收面積/總吸收面積)低于CK,葉片的MDA 含量高于對照,均與對照存在顯著性差異,當香草酸溶液濃度為0.07 mmol?L-1 時,各指標與對照相比分別降低22.4%,54.2%和40.6%,MDA 含量提高43.3%。

(4)根際放線菌數量在花生生育前期隨著草酸濃度的增大而顯著降低,進入結莢期后各處理間差異不顯著。根際細菌數量在花生生育前期時各處理間差異不顯著,而進入結莢期后隨著香草酸濃度的增大而顯著降低。高濃度的香草酸(0.07 mg?kg-1干土)對根際真菌生長具有抑制作用,而低濃度的香草酸(0.01 mg?kg-1 干土)對根際真菌生長具有促進作用。

因此,香草酸對花生種子萌發和幼苗生長存在一定的抑制作用,香草酸亦會抑制花生幼苗的光合作用,降低根系活力,促進幼苗葉片產生丙二醛。此外,不同濃度的香草酸溶液均會使花生根際細菌和放線菌的數量降低,抑制根際土壤中細菌和放線菌的生長繁殖,而對土壤真菌的影響呈現低促高抑的現象,即低濃度的香草酸溶液促進花生根際土壤中真菌的生長;而高濃度則對真菌生長具有一定的抑制作用。

制備[6]

將170g硝酸銀溶于1L水配成的溶液加到2L燒杯內,攪拌下用44g97%氫氧化鈉溶于400ml 水所配制的溶液處理。將混合物攪拌5min,濾去氧化銀,并用水洗滌以除去硝酸鹽。將此氧化銀移至4L燒杯中,加2L水,在劇烈攪拌下,用200g氫氧化鈉固體處理。將混合物熱至55~60℃。繼續攪拌,加入152g香草醛。氧化銀轉變為金屬銀,并放出大量熱。繼續攪拌10分鐘,過濾。用100ml熱水洗滌沉淀的銀。合并濾液和洗液,快速通入二氧化硫2min。在劇烈攪拌下將生成的溶液倒入1.1L的鹽酸(1:1)中,冷至15~20℃,過濾,冰水洗滌。抽干,產量140~160g,產率83~95%。

主要參考資料

[1] 合成香料產品技術手冊

[2] CN201820021553.9一種香草酸連續化生產設備

[3] 王明君, 鄭璞, 孫志浩, 等. 微生物轉化香草酸生產香草醛[J]. 食品與發酵工業, 2004, 30(2): 43.

[4] 龔盛昭, 楊卓如, 林希. 香草酸對酪氨酸酶催化活性的抑制作用[J]. 精細化工, 2005, 22(12): 927-930.

[5] 黃玉茜, 楊勁峰, 梁春浩, 等. 香草酸對花生種子萌發, 幼苗生長及根際微生物區系的影響[J]. 中國農業科學, 2018, 51(9): 1735-1745.

[6]段長強等,現代化學試劑手冊(一),化學工業出版社,507—508(1988)