1934-21-0 / 酸性黃 23的檢測(cè)

背景及概述^[1][2]

酸性黃23又名檸檬黃。為我國(guó)允許使用的人工合成色素之一，又稱肼黃，別名酒石黃，單偶氮色素，為橙黃色粉末，無(wú)臭，0.1%水溶液呈黃色，耐熱性、耐酸性、耐光性、耐鹽性均較好。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期、廣泛的動(dòng)物毒性試驗(yàn)證明其安全性很高。ADI值為0～7.5mg/kg體重。單獨(dú)或與其他色素混合使用時(shí)，最大使用量為0.1g/kg。

食用檸檬黃，食用合成色素三原色之一，也是在世界上被允準(zhǔn)用于食品著色最廣泛的一個(gè)合成色素，約占全球合成色素總量的百分之三十。而在中國(guó)的食用合成色素3000噸年需求中，檸檬黃占1200噸，約占百分之四十強(qiáng)。

制備^[2]

一種檸檬黃的制備方法，步驟包括：

(a)2-乙?；《岫谆ヅc摩爾比為1∶0.90-1.10的對(duì)氨基苯磺酸重氮鹽在以2-乙?；《岫谆サ奈镔|(zhì)的量計(jì)摩爾比為0.05-0.5的相轉(zhuǎn)移催化劑和以2-乙酰基丁二酸二甲基酯的物質(zhì)的量計(jì)摩爾比為1.5-2.5的縛酸劑存在下進(jìn)行縮合，得到縮合物，所述相轉(zhuǎn)移催化劑包括聚乙二醇、司班、吐溫、平平加0或其組合；

(b)所述縮合物與以縮合物的物質(zhì)地量計(jì)摩爾比為0.90-1.10的對(duì)氨基苯磺酸重氮鹽偶合并水解，得到檸檬黃。

具體操作舉例如下：

500mL四頸瓶中，加入60℃熱水180mL，加入20g聚乙二醇400(PEG-400)， 快速攪拌下加入對(duì)氨基苯磺酸34.6g(0.20mol)，攪拌十分鐘，冷至室溫，加入工業(yè)鹽酸32mL(31％)。繼續(xù)冷至0-5℃，液下滴加30％亞硝酸鈉溶液 47g(0.20mol)，維持溫度5-10℃，約20min加畢，剛果紅試紙藍(lán)色、碘化鉀 淀粉試紙淺藍(lán)色。加畢后繼續(xù)攪20min，加少量氨磺酸消去過(guò)量的亞硝酸。

上述重氮液中，攪拌5min后細(xì)流加入DMAS(2-乙酰基丁二酸二甲酯) 37.64g(0.20mol)，控制溫度10-15℃，慢慢滴加15wt％磷酸氫二鈉溶液調(diào) pH至5.0，體系轉(zhuǎn)成透明的酒紅色。待重氮鹽消失后，再攪拌半小時(shí)，制得縮合液。另行再制備一份重氮鹽。消去過(guò)量的亞硝酸后加入15％磷酸氫二鈉溶液調(diào) pH 1.0-2.0。

前述縮合液轉(zhuǎn)至1000mL四頸瓶中，加20wt％純堿水溶液調(diào)PH8.0-9.0。攪拌下細(xì)流加入第二份重氮鹽，溫度15-20℃，約20min加完，pH6.5-8.0。加完后再攪拌半小時(shí)制得偶合液。偶合液中撒入純堿調(diào)pH9.0-9.5，升溫至80-90℃，保溫一小時(shí)。隔套冷卻至55℃，加鹽酸約20mL調(diào)PH6.5-7.5。抽濾，按體積的10％量加入精鹽， 攪拌至溶解，繼續(xù)慢慢冷卻至5-10℃。抽濾。濾餅溶于2000mL水中，進(jìn)實(shí)驗(yàn) 室膜分離裝置(0.3Mpa、45-50℃)脫鹽至料液電導(dǎo)率恒定不下降及料液體積 300mL止，濃縮液于烘箱中80℃烘干得成品108.4g，含量90.1％，液相純度 99.48％(238nm)，收率91.4％。

檢測(cè)方法^[3]

一、對(duì)檸檬黃的現(xiàn)代分析手段已非常成熟，且靈敏度較高。

常用的檢測(cè)方法有TLC、HPLC、電化學(xué)分析法、新型生物傳感器法、紫外分光光度法等，這些檢測(cè)方法特點(diǎn)顯著，各有千秋。但由于某些樣品基體成分復(fù)雜，含量低，直接測(cè)定較為困難。為此在檢測(cè)前先對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，再用較為簡(jiǎn)便的方法進(jìn)行含量測(cè)定，可以顯著提升樣品中檸檬黃色素檢測(cè)的選擇性和靈敏度，提高檢測(cè)效率。

傳統(tǒng)的樣品前處理方法主要有SPE、LLE、UAE、MAE等。但這些方法存在著不少缺點(diǎn)，如處理過(guò)程存在有毒、有機(jī)溶劑，操作過(guò)程繁瑣，時(shí)間成本較高，甚 至?xí)鸱治鑫镔|(zhì)的分解或流失。因此，要達(dá)到快速、準(zhǔn)確的測(cè)定固體菓珍、果凍等基質(zhì)復(fù)雜的食品樣品中檸檬黃，對(duì)樣品的前處理-預(yù)富集具有關(guān)鍵性的作用。

CN201810032455.X提供了一種檸檬黃的檢測(cè)方法，以達(dá)到有效從食品中分離檢測(cè)檸檬黃的目的，本方法檢測(cè)限低，顯著提升樣品中檸檬黃色素檢測(cè)的選擇性和 靈敏度，提高檢測(cè)效率。

技術(shù)方案如下：一種檸檬黃的檢測(cè)方法，采用吸附柱對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)富集，加入解吸劑進(jìn)行洗脫，采用紫外-分光光度法測(cè)定洗脫液中檸檬黃的含量，其中，所述吸附柱中的吸附劑為胺化腐植酸-納米SiO2復(fù)合材料。本發(fā)明選用對(duì)檸檬黃色素吸附效果較好的胺化腐植酸-納米SiO2復(fù)合材料制備吸附柱，再聯(lián)用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)食品樣品中檸檬黃含量進(jìn)行檢測(cè)，用以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中檸檬黃的有效檢測(cè)和評(píng)價(jià)分析。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：(1)本發(fā)明的前處理方法操作過(guò)程簡(jiǎn)便，時(shí)間短，無(wú)毒，分析物質(zhì)不流失；(2)本發(fā)明對(duì)檸檬黃色素的檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度較好，檢測(cè)時(shí)間短，能很好地應(yīng)用于檸檬黃色素的快速檢測(cè)，具有較大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與優(yōu)勢(shì)；(3)本發(fā)明使用的HA-T-S復(fù)合材料具有良好的解吸性能且重復(fù)利用率高。

二、CN201410427037.2提供一種檢測(cè)飲料樣品中檸檬黃含量的方法。

CN201410427037.2檢測(cè)檸檬黃含量的原理：氧化石墨烯對(duì)有機(jī)化合物是一種非常有效的熒光淬滅劑。以386nm波長(zhǎng)激發(fā)，靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿在483nm處出現(xiàn)了最大熒光發(fā)射峰，當(dāng)在靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿中加入一定量納米氧化石墨烯懸浮液后發(fā)現(xiàn)，其熒光強(qiáng)度直線下降，這是由于氧化石墨烯具有對(duì)熒光淬滅效應(yīng)所致，當(dāng)向上述溶液加入一定量的檸檬黃后，靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿的熒光強(qiáng)度又增強(qiáng)，這是由于檸檬黃與納米氧化石墨烯（rGO）的吸附作用大于靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿與納米氧化石墨烯（rGO）之間的吸附作用力。

靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿被從納米氧化石墨烯（rGO）表面脫附下來(lái)，這也同時(shí)說(shuō)明納米氧化 石墨烯（rGO）和檸檬黃（Tz）可以作為靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿的熒光分子開(kāi)關(guān)組，據(jù)此建立了靛紅雙席夫堿-氧化石墨烯熒光傳感器快速檢測(cè)檸檬黃含量的新方法。

具體步驟為：

（1）準(zhǔn)確稱取0.0122g靛紅縮對(duì)苯二胺雙席夫堿溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶劑中，用超純水稀釋，配置成122ng/mL的溶液。

（2）準(zhǔn)確稱取0.0532g納米氧化石墨烯（rGO）溶于5mL超純水后定容于10mL容量瓶中，獲得濃度為5.32mg/mL的納米氧化石墨烯儲(chǔ)備懸浮液，置于陰涼處保存待用，用時(shí)稀釋成不同濃度的溶液。

（3）將步驟（2）所得的濃度為5.32mg/mL的納米氧化石墨烯儲(chǔ)備懸浮液稀釋配制成 濃度為2.66μg/mL的納米氧化石墨烯懸浮液。

（4）在一個(gè)10mL具塞試管中加入2mL步驟（1）所得溶液和2mL步驟（3）所得濃度為 2.66μg/mL的納米氧化石墨烯懸浮液，充分搖勻，得到混合溶液。

（5）在步驟（4）所得混合溶液中，分別加入2mL 濃度為8.58ng/L～327ng/L的檸檬黃溶液，混合均勻后，各取適量該溶液于10mm比色皿中，在室溫條件下，控制狹縫寬度均為5.0，激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)λex/λem=386nm/483nm，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度（F），結(jié)果表明檸檬 黃濃度在8.58ng/L～327ng/L范圍內(nèi)時(shí)，熒光強(qiáng)度（F）與檸檬黃溶液的濃度具有良好的線性關(guān)系，計(jì)算得到的其線性回歸方程為F = 0.4454CTz－2.9562，R=0.991，檢出限為0.34ng/L。

（6）加熱煮沸除去飲料中的CO₂，準(zhǔn)確量取該飲料5.00mL，用超純水定容至50mL，再將該溶液加入到步驟（4）所得混合溶液中，取適量該混合溶液于10mm比色皿中，在室溫條件 下，控制狹縫寬度均為5.0，激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)λex/λem=386nm/483nm，測(cè)定其熒光強(qiáng)度 （F），代入步驟（5）中的線性回歸方程，計(jì)算飲料樣品中檸檬黃的濃度和檸檬黃的含量。

主要參考資料

[1]衛(wèi)生學(xué)大辭典

[2]CN200510030644.6 檸檬黃的制備方法

[3]CN201810032455.X 一種檸檬黃的檢測(cè)方法

[4]CN201410427037.2 一種檢測(cè)飲料樣品中檸檬黃含量的方法