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間苯三酚（1,3,5-三羥基苯）是一種重要的精細化工產品，主要用于藥物合成的中間體，例如黃酮類化合物。作為治療心腦血管病的藥物，黃酮類化合物愈來愈受到藥物學家的重視。
a、溴化反應：以間苯二酚為原料，首先將間苯二酚加入反應容器中，然后加入氯仿進行溶解，溶解后將N-溴代丁二酰亞胺溶于氯仿中得到的N-溴代丁二酰亞胺溶液滴加到反應容器中，N-溴代丁二酰亞胺溶液滴加時間為30min，滴加完后升溫至60℃，在此溫度條件下反應1h，反應后得到反應液，將所得反應液常壓蒸出氯仿，蒸出氯仿后所得液體進行減壓蒸餾，在真空度0.098MPa下收集150～160℃餾分，將所得餾分冷卻至常溫，得到4-溴間苯二酚；
所述間苯二酚與氯仿二者之間加入量的比例為每克間苯二酚加入氯仿2mL，所述N-溴代丁二酰亞胺與氯仿之間加入量的比例為每克N-溴代丁二酰亞胺加入氯仿0.9mL，所述間苯二酚與N-溴代丁二酰亞胺二者之間的質量比為1:1.7；
b、水解反應：將步驟a得到的4-溴間苯二酚加入反應容器中，然后加入二甲苯、氫氧化鉀和催化劑銅，升溫至140℃條件下回流反應6h；反應后將反應產物冷卻至60℃以下，并加入水攪拌降溫至室溫，過濾除去催化劑銅，過濾后得到的反應液靜置分層，分層后取水相，得到間苯三酚鉀鹽溶液；
所述4-溴間苯二酚與二甲苯二者之間的加入量為每克4-溴間苯二酚加入二甲苯1.35mL，所述4-溴間苯二酚與氫氧化鉀之間加入的質量比為1:1.06，所述4-溴間苯二酚與催化劑銅二者之間的質量比為21:1；
c、酸化反應：將步驟b得到的間苯三酚鉀鹽溶液加入反應容器中，在攪拌條件下采用濃度為0.6mol/L的鹽酸調節其pH值為1～3，在此條件下析出固體，固體析出結束后進行過濾，得到固體間苯三酚粗品；
d、粗品提純：將步驟c所得間苯三酚粗品加入反應容器中，并加入水加熱至90～100℃進行充分溶解，所述水的加入量為間苯三酚粗品質量的4倍，溶解后加入活性炭回流脫色30min，活性炭的加入量占間苯三酚粗品質量的3.6%，脫色后在90～100℃條件下進行熱過濾，所得濾液自然冷卻析晶，析晶結束后過濾，所得產品采用純化水沖洗，沖洗后進行干燥，干燥溫度為50℃，干燥時間為5h，干燥后得到間苯三酚。所得產品的純度為99.9%，其收率為73.2%。
生物催化合成間苯三酚的方法步驟是：
(一)抗間苯三酚突變株的篩選
將菌體稀釋到一定濃度，然后取菌液加入NaNO2溶液和HAC?NaAC緩沖液的混合液中，在37℃左右水浴振蕩培養。分別加入到Na2HPO4緩沖溶液混勻，并涂在含LiCl的平板上，37℃左右避光培養。
(二)phlD1基因克隆及重組菌株的獲得
提取細菌Pseudomonas fluorescens Pf?5基因組DNA，PCR擴增獲得多聚酮合成酶基因(phlD)；再利用定點突變方法獲得變異基因phlD1，膠回收試劑盒回收目的片段，相應的限制性內切酶酶切目的片段，37℃左右，3?4小時，乙醇沉淀純化目的片斷；用相同的限制性內切酶酶切原核表達載體pET?30a(+)，膠回收試劑盒回收純化；載體與外源片段按摩爾比1∶3?10的比例，16℃左右連接過夜，即為構建好的原核表達載體pET?phlD1；將構建好的重組質粒42℃熱擊轉化到抗間苯三酚大腸桿菌中，經酶切鑒定、PCR鑒定和測序篩選獲得陽性重組菌株；?80℃左右保存該菌株。
(三)工程大腸桿菌誘導表達
將工程菌接種到LB液體培養液中(內含30?50μg·mL?1的卡那霉素)，37℃左右振蕩培養至OD600約為0.4?0.6時，在菌液中加入誘導劑IPTG，繼 續在37℃左右培養3?5小時，誘導表達目的蛋白；取出誘導后的培養液，取沉淀用磷酸緩沖液洗滌，按1:10的比例(w/v)再用此緩沖液重懸細胞，加入2×SDS?PAGE上樣緩沖液，煮沸，SDS?PAGE電泳檢測，即可檢測到表達的相應融合蛋白條帶。
(四)間苯三酚的發酵
配制發酵培養基，滅菌，冷卻時進行無菌接種。按照正交實驗優化結果，培養基初始，并通過溫度電極和pH電極感應，自動調節發酵液的溫度和pH，攪拌發酵培養。
(五)間苯三酚的提取
發酵上清液中的間苯三酚，經乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯并減壓濃縮，制得間苯三酚。
[1] [中國發明,中國發明授權] CN201310622931.0 間苯三酚的制備方法
[2] [中國發明,中國發明授權] CN200810225401.1 微生物催化合成間苯三酚